আমি পূৰ্বে ৰিপ’ৰ্ট কৰিছিলো যে লিভাৰ ফাইব্ৰ’ছিছ ৰোগীৰ ক্ষেত্ৰত আন্ত্ৰিক অংশৰ পৰা আহৰণ কৰা ট্ৰিপ্ট’ফেন বিপাকীয় পদাৰ্থ ইণ্ড’ল-৩-প্ৰ’পিঅ’নিক এচিড (IPA)ৰ ছিৰামৰ মাত্ৰা কম। এই অধ্যয়নত আমি মেদবহুল যকৃতৰ ট্ৰেন্সক্ৰিপ্টম আৰু ডি এন এ মিথাইলমৰ ছিৰাম আই পি এৰ মাত্ৰাৰ সৈতে সম্পৰ্কিতভাৱে অনুসন্ধান কৰিলোঁ, লগতে ইন ভিট্ৰ’ত হেপাটিক ষ্টেলেট কোষ (এইচ এছ চি)ৰ ফেন’টাইপিক নিষ্ক্ৰিয়কৰণ প্ৰৰোচিত কৰাত আই পি এৰ ভূমিকাও অনুসন্ধান কৰিলোঁ।
এই অধ্যয়নত টাইপ ২ ডায়েবেটিছ মেলিটাছ (T2DM) নথকা ১১৬ জন মেদবহুল ৰোগী (বয়স ৪৬.৮ ± ৯.৩ বছৰ; বিএমআই: ৪২.৭ ± ৫.০ কিলোগ্ৰাম/মিটাৰ বৰ্গফুট)ক কুওপিঅ’ বেৰিয়াট্ৰিক চাৰ্জাৰী চেণ্টাৰ (KOBS)ত বেৰিয়াট্ৰিক অস্ত্ৰোপচাৰ কৰা হৈছিল। লিকুইড ক্ৰ’মাট’গ্ৰাফী-মাছ স্পেকট্ৰ’মেট্ৰি (এল চি-এম এছ) দ্বাৰা পৰিভ্ৰমণকাৰী আই পি এৰ মাত্ৰা জুখিছিল, যকৃতৰ ট্ৰেন্সক্ৰিপ্টম বিশ্লেষণ মুঠ আৰ এন এ ক্ৰমবিন্যাসৰ দ্বাৰা কৰা হৈছিল আৰু ইনফিনিয়াম হিউমেনমিথাইলেচন৪৫০ বিডচিপ ব্যৱহাৰ কৰি ডি এন এ মিথাইলেচন বিশ্লেষণ কৰা হৈছিল। ইন ভিট্ৰ’ পৰীক্ষাৰ বাবে মানৱ যকৃতৰ ষ্টেলেট কোষ (LX-2) ব্যৱহাৰ কৰা হৈছিল।
ছিৰাম আইপিএৰ মাত্ৰা যকৃতত এপ’প্টোটিক, মাইট’ফেজিক আৰু দীৰ্ঘায়ু পথৰ সৈতে জড়িত জিনৰ প্ৰকাশৰ সৈতে সম্পৰ্কিত আছিল। যকৃতৰ ট্ৰান্সক্ৰিপ্ট আৰু ডি এন এ মিথাইলেচন প্ৰফাইলত AKT serine/threonine kinase 1 (AKT1) জিন আছিল আটাইতকৈ প্ৰচুৰ আৰু প্ৰধান পাৰস্পৰিক ক্ৰিয়া কৰা জিন। আইপিএ চিকিৎসাই এপ'প্টোছিছৰ প্ৰৰোচনা কৰে, মাইট'কণ্ড্ৰিয়াৰ শ্বাস-প্ৰশ্বাস হ্ৰাস কৰে আৰু ফাইব্ৰ'ছিছ, এপ'প্টোছিছ আৰু এলএক্স-২ কোষৰ অস্তিত্ব নিয়ন্ত্ৰণ কৰা বুলি জনা জিনৰ প্ৰকাশক নিয়ন্ত্ৰণ কৰি কোষৰ আকৃতি আৰু মাইট'কণ্ড্ৰিয়াৰ গতিবিদ্যাৰ পৰিৱৰ্তন ঘটায়।
এই তথ্যসমূহ একেলগে ল’লে সমৰ্থন কৰে যে আই পি এৰ সম্ভাৱ্য চিকিৎসা প্ৰভাৱ আছে আৰু ই এপ’প্টোছিছক প্ৰৰোচিত কৰিব পাৰে আৰু এইচ এছ চি ফেন’টাইপক নিষ্ক্ৰিয় অৱস্থাৰ ফালে স্থানান্তৰিত কৰিব পাৰে, যাৰ ফলত এইচ এছ চি সক্ৰিয়কৰণ আৰু মাইট’কণ্ড্ৰিয়াল বিপাকীয় ক্ৰিয়াত হস্তক্ষেপ কৰি যকৃতৰ ফাইব্ৰ’ছিছক বাধা দিয়াৰ সম্ভাৱনা বৃদ্ধি পায়।
মেদবহুলতা আৰু বিপাকীয় চিনড্ৰমৰ প্ৰাদুৰ্ভাৱ বিপাকীয়ভাৱে জড়িত চৰ্বিযুক্ত যকৃতৰ ৰোগ (MASLD)ৰ প্ৰাদুৰ্ভাৱ বৃদ্ধিৰ সৈতে জড়িত; এই ৰোগে সাধাৰণ জনসংখ্যাৰ ২৫%ৰ পৰা ৩০% লোকক আক্ৰান্ত কৰে [1] । MASLD ৰ মূল পৰিণতি হ'ল লিভাৰ ফাইব্ৰ'ছিছ, যিটো গতিশীল প্ৰক্ৰিয়া যাৰ বৈশিষ্ট্য হৈছে আঁহযুক্ত বহিঃকোষীয় মেট্ৰিক্স (ECM) অবিৰতভাৱে সঞ্চয় হয় [2] । যকৃতৰ ফাইব্ৰ'ছিছৰ লগত জড়িত মূল কোষসমূহ হ'ল হেপাটিক ষ্টেলেট কোষ (HSCs), যিয়ে চাৰিটা জনাজাত ফেন'টাইপ প্ৰদৰ্শন কৰে: নিস্তব্ধ, সক্ৰিয়, নিষ্ক্ৰিয় আৰু বয়সীয়াল [3, 4]। এইচ এছ চিসমূহক সক্ৰিয় কৰি নিস্তব্ধ ৰূপৰ পৰা উচ্চ শক্তিৰ চাহিদা থকা প্ৰলিফেৰেটিভ ফাইব্ৰ'ব্লাষ্টৰ দৰে কোষলৈ স্থানান্তৰিত কৰিব পাৰি, য'ত α-মসৃণ পেশী এক্টিন (α-SMA) আৰু প্ৰকাৰ I কলাজেন (Col-I)ৰ প্ৰকাশ বৃদ্ধি পায় [5, 6]। যকৃতৰ ফাইব্ৰ’ছিছ উলটি যোৱাৰ সময়ত সক্ৰিয় এইচ এছ চিসমূহ এপ’প্টোছিছ বা নিষ্ক্ৰিয়কৰণৰ জৰিয়তে আঁতৰাই পেলোৱা হয়। এই প্ৰক্ৰিয়াসমূহৰ ভিতৰত ফাইব্ৰ'জেনিক জিনৰ ডাউনৰেগুলেচন আৰু প্ৰ'চাৰ্ভাইভেল জিনৰ মডুলেচন (যেনে NF-κB আৰু PI3K/Akt সংকেত পথ) [7, 8], লগতে মাইট'কণ্ড্ৰিয়াৰ গতিশীলতা আৰু কাৰ্য্যৰ পৰিৱৰ্তন [9] অন্তৰ্ভুক্ত।
অন্ত্ৰত উৎপন্ন হোৱা ট্ৰিপ্ট’ফেন বিপাকীয় পদাৰ্থ ইণ্ড’ল-৩-প্ৰ’পিঅ’নিক এচিড (IPA)ৰ ছিৰামৰ মাত্ৰা MASLDকে ধৰি মানুহৰ বিপাকীয় ৰোগত হ্ৰাস পোৱা দেখা গৈছে [10–13]। আইপিএ খাদ্যৰ আঁহ গ্ৰহণৰ সৈতে জড়িত, ইয়াৰ এন্টিঅক্সিডেন্ট আৰু এন্টি-ইনফ্লেমেটৰী প্ৰভাৱৰ বাবে জনাজাত আৰু ই খাদ্য-প্ৰৰোচিত নন-এলকহলিক ষ্টেট'হেপাটাইটিছ (NASH) ফেন'টাইপক ইন ভিভ' আৰু ইন ভিট্ৰ'ত ক্ষীণ কৰে [11–14]। কিছুমান প্ৰমাণ আমাৰ পূৰ্বৰ অধ্যয়নৰ পৰা পোৱা গৈছে, যিয়ে প্ৰমাণ কৰিছিল যে কুওপিঅ’ বেৰিয়াট্ৰিক চাৰ্জাৰী ষ্টাডি (KOBS)ত লিভাৰ ফাইব্ৰ’ছিছ নথকা মেদবহুল ৰোগীতকৈ লিভাৰ ফাইব্ৰ’ছিছ ৰোগীৰ ছিৰাম আইপিএৰ মাত্ৰা কম আছিল। তদুপৰি, আমি দেখুৱালোঁ যে আই পি এ চিকিৎসাই মানৱ যকৃতৰ ষ্টেলেট কোষ (LX-2) মডেলত কোষৰ আঠাযুক্ততা, কোষ প্ৰব্ৰজন আৰু ৰক্তসৃষ্টিকাৰী ষ্টেম চেল সক্ৰিয়কৰণৰ ধ্ৰুপদী চিহ্নিতকাৰী জিনৰ প্ৰকাশ হ্ৰাস কৰিব পাৰে আৰু ই এটা সম্ভাৱ্য যকৃতৰ সুৰক্ষামূলক বিপাকীয় পদাৰ্থ [15] । কিন্তু আই পি এয়ে এইচ এছ চি এপ’প্টোছিছ আৰু মাইট’কণ্ড্ৰিয়াল বায়’এনাৰ্জেটিক্স সক্ৰিয় কৰি লিভাৰ ফাইব্ৰ’ছিছ ৰিগ্ৰেছন কেনেকৈ প্ৰৰোচিত কৰে সেয়া স্পষ্ট নহয়।
ইয়াত আমি দেখুৱাইছো যে ছিৰাম আইপিএ মেদবহুল কিন্তু নন-টাইপ ২ ডায়েবেটিছ (KOBS) ব্যক্তিৰ যকৃতত এপ’প্টোছিছ, মাইট’ফেজি আৰু দীৰ্ঘায়ুৰ পথত সমৃদ্ধ জিনৰ প্ৰকাশৰ সৈতে জড়িত। তদুপৰি আমি দেখিলোঁ যে আই পি এয়ে নিষ্ক্ৰিয়কৰণ পথৰ জৰিয়তে সক্ৰিয় ৰক্তসৃষ্টিকাৰী ষ্টেম চেল (HSC)ৰ ক্লিয়াৰেন্স আৰু অৱক্ষয়ৰ প্ৰৰোচনা কৰিব পাৰে। এই ফলাফলসমূহে আইপিএৰ বাবে এক নতুন ভূমিকা উন্মোচন কৰে, যাৰ ফলত ইয়াক লিভাৰ ফাইব্ৰ’ছিছ ৰিগ্ৰেছনক প্ৰসাৰিত কৰাৰ বাবে এক সম্ভাৱ্য চিকিৎসা লক্ষ্য কৰি তোলা হয়।
KOBS গোটৰ পূৰ্বৰ এক অধ্যয়নত দেখা গৈছে যে লিভাৰ ফাইব্ৰ’ছিছ ৰোগীৰ লিভাৰ ফাইব্ৰ’ছিছ নথকা ৰোগীৰ তুলনাত চলাচল কৰা আইপিএৰ মাত্ৰা কম [15] । টাইপ ২ ডায়েবেটিছৰ সম্ভাৱ্য বিভ্ৰান্তিকৰ প্ৰভাৱ বাদ দিবলৈ আমি টাইপ ২ ডায়েবেটিছ নথকা ১১৬ জন মেদবহুল ৰোগীক (গড় বয়স ± SD: ৪৬.৮ ± ৯.৩ বছৰ; BMI: ৪২.৭ ± ৫.০ কিলোগ্ৰাম/মিটাৰ বৰ্গফুট) (তালিকা ১)ক অধ্যয়নৰ জনসংখ্যা হিচাপে চলি থকা KOBS অধ্যয়নৰ পৰা নিযুক্তি দিলোঁ [16] । সকলো অংশগ্ৰহণকাৰীয়ে লিখিতভাৱে অৱগত সন্মতি দিছিল আৰু হেলচিংকিৰ ঘোষণা (৫৪/২০০৫, ১০৪/২০০৮ আৰু ২৭/২০১০) অনুসৰি নৰ্থ ছাভো কাউন্টি হাস্পতালৰ নৈতিকতা সমিতিৰ দ্বাৰা অধ্যয়নৰ প্ৰট’কল অনুমোদন কৰা হৈছিল।
লিভাৰৰ বায়'প্সিৰ নমুনা বেৰিয়াট্ৰিক অস্ত্ৰোপচাৰৰ সময়ত লোৱা হৈছিল আৰু পূৰ্বে বৰ্ণনা কৰা মাপকাঠী অনুসৰি অভিজ্ঞ পেথ'লজিষ্টৰ দ্বাৰা হিষ্ট'লজিকেল মূল্যায়ন কৰা হৈছিল [17, 18]। মূল্যায়নৰ মাপকাঠীসমূহ পৰিপূৰক সূচী S1 ত সংক্ষিপ্তভাৱে উল্লেখ কৰা হৈছে আৰু ইয়াৰ পূৰ্বে বৰ্ণনা কৰা হৈছে [19] ।
উপবাসৰ ছিৰামৰ নমুনাসমূহ মেটাব'ল'মিক্স বিশ্লেষণৰ বাবে লক্ষ্যহীন তৰল ক্ৰ'মাট'গ্ৰাফী-গণ বৰ্ণালীবিজ্ঞান (LC-MS) দ্বাৰা বিশ্লেষণ কৰা হৈছিল (n = 116)। পূৰ্বে বৰ্ণনা কৰা ধৰণে UHPLC-qTOF-MS ব্যৱস্থা (1290 LC, 6540 qTOF-MS, Agilent Technologies, Waldbronn, Karlsruhe, Germany) ব্যৱহাৰ কৰি নমুনা বিশ্লেষণ কৰা হৈছিল19। আইছ’প্ৰ’পাইল এলক’হল (IPA) চিনাক্তকৰণ ৰিটেনচন টাইম আৰু বিশুদ্ধ মানদণ্ডৰ সৈতে এম এছ/এম এছ বৰ্ণালীৰ তুলনাৰ ওপৰত ভিত্তি কৰি কৰা হৈছিল। আই পি এ সংকেতৰ তীব্ৰতা (শিখৰ এলেকা) পৰৱৰ্তী সকলো বিশ্লেষণতে বিবেচনা কৰা হৈছিল [20] ।
গোটেই যকৃতৰ আৰ এন এ ক্ৰমবিন্যাস Illumina HiSeq 2500 ব্যৱহাৰ কৰি কৰা হৈছিল আৰু তথ্যসমূহ পূৰ্বে বৰ্ণনা কৰা ধৰণে পূৰ্ব-প্ৰক্ৰিয়াকৰণ কৰা হৈছিল [19, 21, 22]। আমি মাইট'মাইনাৰ ৪.০ ডাটাবেছৰ পৰা নিৰ্বাচিত ১৯৫৭টা জিন ব্যৱহাৰ কৰি মাইট'কণ্ড্ৰিয়াৰ কাৰ্য্য/বায়'জেনেছিছক প্ৰভাৱিত কৰা ট্ৰান্সক্ৰিপ্টৰ লক্ষ্যভিত্তিক ভিন্নতামূলক প্ৰকাশ বিশ্লেষণ কৰিলোঁ [23] । লিভাৰৰ ডি এন এ মিথাইলেচন বিশ্লেষণ পূৰ্বে বৰ্ণনা কৰা পদ্ধতি ব্যৱহাৰ কৰি ইনফিনিয়াম হিউমেনমিথাইলেচন৪৫০ বিডচিপ (ইলুমিনা, ছান ডিয়েগো, চি এ, আমেৰিকা) ব্যৱহাৰ কৰি কৰা হৈছিল [24, 25]।
মানৱ যকৃতৰ ষ্টেলেট কোষ (LX-2) অধ্যাপক ষ্টেফানো ৰোমিঅ'ই সদয়ভাৱে প্ৰদান কৰিছিল আৰু DMEM/F12 মাধ্যমত (Biowest, L0093-500, 1% Pen/Strep; Lonza, DE17-602E, 2% FBS; Gibco, 10270-106) কালচাৰ কৰি ৰখা হৈছিল। আইপিএৰ কাৰ্য্যকৰী মাত্ৰা নিৰ্বাচন কৰিবলৈ এলএক্স-২ কোষক ডিএমইএম/এফ১২ মাধ্যমত ২৪ ঘণ্টা ধৰি আইপিএৰ বিভিন্ন ঘনত্ব (১০ মাইক্ৰ’মিটাৰ, ১০০ মাইক্ৰ’মিটাৰ আৰু ১ মিলিমিটাৰ; চিগমা, ২২০০২৭) শোধন কৰা হৈছিল। তদুপৰি, আই পি এৰ এইচ এছ চি নিষ্ক্ৰিয় কৰাৰ ক্ষমতা অনুসন্ধান কৰিবলৈ এল এক্স-২ কোষক ৫ এন জি/মিলিলিটাৰ টি জি এফ-বেটা ১ (আৰ এণ্ড ডি চিষ্টেম, ২৪০-বি-০০২/চি এফ) আৰু ১ মিলিমিটাৰ আই পি এৰ সৈতে ছিৰামমুক্ত মাধ্যমত ২৪ ঘণ্টা ধৰি সহ-চিকিৎসা কৰা হৈছিল। সংশ্লিষ্ট বাহন নিয়ন্ত্ৰণৰ বাবে TGF-β1 চিকিৎসাৰ বাবে ০.১% BSA যুক্ত ৪ nM HCL আৰু IPA চিকিৎসাৰ বাবে ০.০৫% DMSO ব্যৱহাৰ কৰা হৈছিল, আৰু দুয়োটাকে একেলগে সংমিশ্ৰিত চিকিৎসাৰ বাবে ব্যৱহাৰ কৰা হৈছিল।
এপ’প্টোছিছৰ মূল্যায়ন প্ৰস্তুতকাৰকৰ নিৰ্দেশনা অনুসৰি ৭-এএডি (বায়’লেজেণ্ড, ছান ডিয়েগো, চিএ, আমেৰিকা, কেট# ৬৪০৯২২)ৰ সৈতে এফআইটিচি এনেক্সিন ভি এপ’প্টোছিছ ডিটেকচন কিট ব্যৱহাৰ কৰি কৰা হৈছিল। চমুকৈ ক’বলৈ গ’লে, LX-2 (1 × 105 কোষ/কুঁৱা) 12-well প্লেটত ৰাতিটোৰ বাবে কালচাৰ কৰা হৈছিল আৰু তাৰ পিছত IPA বা IPA আৰু TGF-β1ৰ একাধিক মাত্ৰাৰ দ্বাৰা শোধন কৰা হৈছিল। পিছদিনা ভাসমান আৰু আঠাযুক্ত কোষবোৰ সংগ্ৰহ কৰি ট্ৰিপচিনাইজ কৰি পিবিএছেৰে ধুই এনেক্সিন ভি বান্ধনি বাফাৰত পুনৰ স্থলবন্দী কৰি FITC-এনেক্সিন ভি আৰু ৭-এএডিৰ সৈতে ১৫ মিনিট ইনকিউবেট কৰা হয়।
জীৱিত কোষৰ মাইট’কণ্ড্ৰিয়াক মাইট’ট্ৰেকাৰTM ৰেড চিএমএক্সৰ’ছ (এমটিআৰ) (থাৰ্মো ফিচাৰ চাইন্টিফিক, কাৰ্লছবেড, চিএ) ব্যৱহাৰ কৰি অক্সিডেটিভ কাৰ্য্যকলাপৰ বাবে ৰং কৰা হৈছিল। এমটিআৰ পৰীক্ষাৰ বাবে এলএক্স-২ কোষক আইপিএ আৰু টিজিএফ-বিটা১ৰ সৈতে সমান ঘনত্বত ইনকিউবেট কৰা হৈছিল। ২৪ ঘণ্টাৰ পিছত জীৱিত কোষবোৰক ট্ৰিপচিনাইজ কৰা হয়, পিবিএছৰ দ্বাৰা ধুই লোৱা হয় আৰু তাৰ পিছত পূৰ্বে বৰ্ণনা কৰা ধৰণে ৩৭ ডিগ্ৰী চেলছিয়াছত ছিৰামমুক্ত মাধ্যমত ১০০ মাইক্ৰ'মিটাৰ এমটিআৰৰ সৈতে ২০ মিনিট ইনকিউবেট কৰা হয় [26] । জীৱন্ত কোষৰ আকৃতি বিশ্লেষণৰ বাবে কোষৰ আকাৰ আৰু চাইট’প্লাজমিক জটিলতা ক্ৰমে আগলৈ বিকিৰণ (FSC) আৰু কাষৰ বিকিৰণ (SSC) প্ৰাচল ব্যৱহাৰ কৰি বিশ্লেষণ কৰা হৈছিল।
সকলো তথ্য (৩০,০০০ ইভেন্ট) NovoCyte Quanteon (Agilent) ব্যৱহাৰ কৰি আহৰণ কৰা হৈছিল আৰু NovoExpress® 1.4.1 বা FlowJo V.10 চফ্টৱেৰ ব্যৱহাৰ কৰি বিশ্লেষণ কৰা হৈছিল।
প্ৰস্তুতকাৰকৰ নিৰ্দেশনা অনুসৰি ছিহৰ্ছ এক্সট্ৰাচেলুলাৰ ফ্লাক্স এনালাইজাৰ (এজিলেণ্ট টেকন’লজিছ, চান্টা ক্লাৰা, চিএ) ব্যৱহাৰ কৰি অক্সিজেন ব্যৱহাৰৰ হাৰ (OCR) আৰু বহিঃকোষীয় এচিডিফিকেশনৰ হাৰ (ECAR) জুখিছিল। চমুকৈ ক’বলৈ গ’লে, ২ × ১০৪টা LX-2 কোষ/কুঁৱা XF96 কোষ কালচাৰ প্লেটত বীজ সিঁচা হৈছিল। ৰাতিটো ইনকিউবেচনৰ পিছত কোষবোৰক আইছ’প্ৰ’পেনল (IPA) আৰু TGF-β1 (পৰিপূৰক পদ্ধতি ১) দ্বাৰা শোধন কৰা হৈছিল। তথ্য বিশ্লেষণ ছিহৰ্ছ এক্সএফ ৱেভ চফট্ ৱেৰ ব্যৱহাৰ কৰি কৰা হৈছিল, য’ত ছিহৰ্ছ এক্সএফ চেল এনাৰ্জি ফেন’টাইপ টেষ্ট ৰিপ’ৰ্ট জেনেৰেটৰ অন্তৰ্ভুক্ত কৰা হৈছে। ইয়াৰ পৰা জৈৱশক্তিশালী স্বাস্থ্য সূচকাংক (BHI) গণনা কৰা হৈছিল [27] ।
মুঠ আৰ এন এ চি ডি এন এত ট্ৰান্সক্ৰিপ্ট কৰা হৈছিল। নিৰ্দিষ্ট পদ্ধতিৰ বাবে, প্ৰসংগ [15] চাওক। মানৱ ৬০এছ ৰাইব’জ’মেল এচিডিক প্ৰ’টিন পি০ (আৰপিএলপি০) আৰু চাইক্ল’ফিলিন এ১ (পিপিআইএ) এমআৰএনএৰ মাত্ৰা গঠনমূলক জিন নিয়ন্ত্ৰণ হিচাপে ব্যৱহাৰ কৰা হৈছিল। QuantStudio 6 pro Real-Time PCR System (Thermo Fisher, Landsmeer, The Netherlands) TaqManTM Fast Advanced Master Mix Kit (Applied Biosystems) বা Sensifast SYBR Lo-ROX Kit (Bioline, BIO 94050) ৰ সৈতে ব্যৱহাৰ কৰা হৈছিল, আৰু তুলনামূলক Ct মান চক্ৰীয় প্ৰাচল (ΔΔCt) আৰু আপেক্ষিক জিন প্ৰকাশৰ ভাঁজ গণনা কৰা হৈছিল ∆∆Ct পদ্ধতি। প্ৰাইমাৰসমূহৰ বিৱৰণ পৰিপূৰক সূচী S2 আৰু S3 ত দিয়া হৈছে।
পূৰ্বে বৰ্ণনা কৰা ধৰণে DNeasy ব্লাড এণ্ড টিছু কিট (Qiagen) ব্যৱহাৰ কৰি নিউক্লিয়াৰ ডি এন এ (ncDNA) আৰু মাইট'কণ্ড্ৰিয়াল ডি এন এ (mtDNA) নিষ্কাশন কৰা হৈছিল [28] । পৰিপূৰক পদ্ধতি ২ ত বিতংভাৱে উল্লেখ কৰা অনুসৰি প্ৰতিটো লক্ষ্য mtDNA অঞ্চলৰ আৰু তিনিটা নিউক্লিয়াৰ ডি এন এ অঞ্চলৰ জ্যামিতিক গড় (mtDNA/ncDNA) অনুপাত গণনা কৰি mtDNA ৰ আপেক্ষিক পৰিমাণ গণনা কৰা হৈছিল। mtDNA আৰু ncDNA ৰ বাবে প্ৰাইমাৰৰ বিৱৰণ পৰিপূৰক সূচী S4 ত দিয়া হৈছে।
জীৱন্ত কোষবোৰক মাইট’ট্ৰেকাৰTM ৰেড চিএমএক্সৰ’ছ (এমটিআৰ) (থাৰ্মো ফিচাৰ চাইন্টিফিক, কাৰ্লছবেড, চিএ) দ্বাৰা ৰং কৰা হৈছিল যাতে আন্তঃকোষীয় আৰু আন্তঃকোষীয় মাইট’কণ্ড্ৰিয়াল নেটৱৰ্ক কল্পনা কৰিব পৰা যায়। LX-2 কোষ (1 × 104 কোষ/কুঁৱা) কাঁচৰ স্লাইডত সংশ্লিষ্ট কাঁচৰ তলৰ কালচাৰ প্লেট (Ibidi GmbH, Martinsried, Germany) ত কালচাৰ কৰা হৈছিল। ২৪ ঘণ্টাৰ পিছত জীৱিত LX-2 কোষক ১০০ μM MTR ৰ সৈতে ৩৭ ডিগ্ৰী চেলছিয়াছত ২০ মিনিট ইনকিউবেট কৰা হয় আৰু কোষৰ নিউক্লিয়াছক পূৰ্বে বৰ্ণনা কৰা ধৰণে DAPI (১ μg/ml, চিগমা-এলড্ৰিচ) দ্বাৰা ৰং কৰা হয় [29] । 63×NA 1.3 উদ্দেশ্য ব্যৱহাৰ কৰি 5% CO2 ৰ সৈতে আৰ্দ্ৰ বায়ুমণ্ডলত 37 °C ত Zeiss LSM 800 কনফ’কেল মডিউলৰ সৈতে সজ্জিত Zeiss Axio Observer inverted microscope (Carl Zeiss Microimaging GmbH, Jena, Germany) ব্যৱহাৰ কৰি মাইট’কণ্ড্ৰিয়াল নেটৱৰ্কসমূহ দৃশ্যমান কৰা হৈছিল। আমি প্ৰতিটো নমুনা প্ৰকাৰৰ বাবে দহটা জেড-ছিৰিজৰ ছবি আহৰণ কৰিলোঁ। প্ৰতিটো জেড-ছিৰিজত ৩০টা অংশ থাকে, প্ৰত্যেকৰে ডাঠতা ৯.৮৬ মাইক্ৰ’মিটাৰ। প্ৰতিটো নমুনাৰ বাবে ZEN 2009 চফট্ ৱেৰ (Carl Zeiss Microimaging GmbH, Jena, Germany) ব্যৱহাৰ কৰি দহটা ভিন্ন দৃষ্টিক্ষেত্ৰৰ ছবি আহৰণ কৰা হৈছিল আৰু পৰিপূৰক পদ্ধতি 3 ত বিশদভাৱে উল্লেখ কৰা প্ৰাচল অনুসৰি ImageJ চফট্ ৱেৰ (v1.54d) [30, 31] ব্যৱহাৰ কৰি মাইট'কণ্ড্ৰিয়াল মৰ্ফ'লজী বিশ্লেষণ কৰা হৈছিল।
কোষবোৰক ০.১ এম ফছফেট বাফাৰত ২% গ্লুটাৰএলডিহাইডৰ দ্বাৰা স্থাপন কৰা হৈছিল, তাৰ পিছত ১% অস্মিয়াম টেট্ৰ’ক্সাইড দ্ৰৱণেৰে (চিগমা এলড্ৰিচ, এম অ’, আমেৰিকা) স্থাপন কৰা হৈছিল, ক্ৰমান্বয়ে এচিটন (মাৰ্ক, ডাৰ্মষ্টাড, জাৰ্মানী) দ্বাৰা পানীমুক্ত কৰা হৈছিল আৰু শেষত ইপক্সি ৰেজিনত সোমাই দিয়া হৈছিল। অতি পাতল অংশ প্ৰস্তুত কৰি ১% ইউৰেনাইল এচিটেট (মাৰ্ক, ডাৰ্মষ্টাড, জাৰ্মানী) আৰু ১% সীহ চাইট্ৰেট (মাৰ্ক, ডাৰ্মষ্টাড, জাৰ্মানী) দ্বাৰা ৰং কৰা হৈছিল। ৮০ কেভিৰ ত্বৰান্বিত ভল্টেজত JEM 2100F EXII ট্ৰেন্সমিছন ইলেক্ট্ৰন মাইক্ৰস্কোপ (JEOL Ltd, Tokyo, Japan) ব্যৱহাৰ কৰি আল্ট্ৰাষ্ট্ৰাকচাৰেল ছবি লাভ কৰা হৈছিল।
আইপিএৰ দ্বাৰা ২৪ ঘণ্টা ধৰি চিকিৎসা কৰা এলএক্স-২ কোষৰ আকৃতি জেইছ ইনভাৰ্টেড লাইট মাইক্ৰস্কোপ (জেইছ এক্সিঅ’ ভাৰ্ট.এ১ আৰু এক্সিঅ’কেম এমআৰএম, জেনা, জাৰ্মানী) ব্যৱহাৰ কৰি ৫০x বৃদ্ধিত ফেজ-কনট্ৰাষ্ট মাইক্ৰস্কোপিৰ দ্বাৰা বিশ্লেষণ কৰা হৈছিল।
ক্লিনিকেল তথ্য গড় ± মানক বিচ্যুতি বা মধ্যমা (আন্তঃচতুৰ্থাংশ পৰিসৰ: IQR) হিচাপে প্ৰকাশ কৰা হৈছিল। তিনিটা অধ্যয়ন গোটৰ মাজত পাৰ্থক্য তুলনা কৰিবলৈ ভ্যাৰিয়েন্সৰ একমুখী বিশ্লেষণ (অবিৰত চলক) বা χ2 পৰীক্ষা (শ্ৰেণীগত চলক) ব্যৱহাৰ কৰা হৈছিল। একাধিক পৰীক্ষাৰ বাবে সংশোধন কৰিবলৈ মিছা ধনাত্মক হাৰ (FDR) ব্যৱহাৰ কৰা হৈছিল, আৰু FDR < 0.05 থকা জিনসমূহক পৰিসংখ্যাগতভাৱে গুৰুত্বপূৰ্ণ বুলি ধৰা হৈছিল। আইপিএ সংকেতৰ তীব্ৰতাৰ সৈতে চিপিজি ডিএনএ মিথাইলেচনৰ সম্পৰ্ক স্থাপন কৰিবলৈ স্পিয়াৰমেন সম্পৰ্ক বিশ্লেষণ ব্যৱহাৰ কৰা হৈছিল, নামমাত্ৰ পি মান (p < 0.05) ৰিপৰ্ট কৰা হৈছিল।
ৱেব-ভিত্তিক জিন ছেট বিশ্লেষণ সঁজুলি (WebGestalt) ব্যৱহাৰ কৰি ২৬৮টা ট্ৰান্সক্ৰিপ্ট (নামমাত্ৰ p < ০.০১), ১১৯টা মাইট’কণ্ড্ৰিয়া-সংলগ্ন ট্ৰান্সক্ৰিপ্ট (নামমাত্ৰ p < ০.০৫), আৰু ৩০৯৩টা যকৃতৰ ট্ৰান্সক্ৰিপ্টৰ ভিতৰত ৪৩৫০টা চিপিজিৰ বাবে কৰা হৈছিল যিবোৰ চলাচল কৰা ছিৰাম আইপিএৰ মাত্ৰাৰ সৈতে জড়িত আছিল। মুক্তভাৱে উপলব্ধ ভেনি ডি বি (সংস্কৰণ ২.১.০) সঁজুলি ব্যৱহাৰ কৰি ওভাৰলেপিং জিন বিচাৰি উলিওৱা হৈছিল, আৰু প্ৰটিন-প্ৰটিনৰ পাৰস্পৰিক ক্ৰিয়াক কল্পনা কৰিবলৈ StringDB (সংস্কৰণ ১১.৫) ব্যৱহাৰ কৰা হৈছিল।
LX-2 পৰীক্ষাৰ বাবে D’Agostino-Pearson পৰীক্ষা ব্যৱহাৰ কৰি নমুনাবোৰৰ স্বাভাৱিকতাৰ পৰীক্ষা কৰা হৈছিল। অন্ততঃ তিনিটা জৈৱিক প্ৰতিলিপিৰ পৰা তথ্য আহৰণ কৰা হৈছিল আৰু বনফেৰ’নি পষ্ট হক পৰীক্ষাৰ সৈতে একমুখী ANOVA কৰা হৈছিল। ০.০৫তকৈ কম p-মানক পৰিসংখ্যাগতভাৱে গুৰুত্বপূৰ্ণ বুলি ধৰা হৈছিল। তথ্যসমূহ গড় ± SD হিচাপে উপস্থাপন কৰা হৈছে, আৰু প্ৰতিটো চিত্ৰত পৰীক্ষাৰ সংখ্যা দেখুওৱা হৈছে। সকলো বিশ্লেষণ আৰু গ্ৰাফ উইণ্ড'জৰ বাবে গ্ৰাফপেড প্ৰিজম ৮ পৰিসংখ্যা চফ্টৱেৰ (গ্ৰাফপেড চফ্টৱেৰ ইনকৰ্পৰেটেড, সংস্কৰণ ৮.৪.৩, ছান ডিয়েগো, আমেৰিকা) ব্যৱহাৰ কৰি কৰা হৈছিল।
প্ৰথমে আমি যকৃত, গোটেই শৰীৰ আৰু মাইট’কণ্ড্ৰিয়াৰ ট্ৰান্সক্ৰিপ্টৰ সৈতে ছিৰাম আইপিএৰ মাত্ৰাৰ সম্পৰ্ক অনুসন্ধান কৰিলোঁ। মুঠ ট্ৰান্সক্ৰিপ্ট প্ৰফাইলত ছিৰাম আইপিএৰ মাত্ৰাৰ সৈতে জড়িত আটাইতকৈ শক্তিশালী জিনটো আছিল MAPKAPK3 (FDR = 0.0077; মাইট’জেন-সক্ৰিয় প্ৰটিন কাইনেজ-সক্ৰিয় প্ৰটিন কাইনেজ 3); মাইট'কণ্ড্ৰিয়া-সম্পৰ্কীয় ট্ৰান্সক্ৰিপ্ট প্ৰফাইলত, আটাইতকৈ শক্তিশালী সংশ্লিষ্ট জিন আছিল AKT1 (FDR = 0.7621; AKT serine/threonine kinase 1) (অতিৰিক্ত ফাইল 1 আৰু অতিৰিক্ত ফাইল 2)।
তাৰ পিছত আমি গ্লোবেল ট্ৰান্সক্ৰিপ্ট (n = 268; p < 0.01) আৰু মাইট'কণ্ড্ৰিয়া-সংলগ্ন ট্ৰান্সক্ৰিপ্ট (n = 119; p < 0.05) বিশ্লেষণ কৰিলোঁ, শেষত এপ'প্টোছিছক আটাইতকৈ উল্লেখযোগ্য কেন'নিক পথ হিচাপে চিনাক্ত কৰিলোঁ (p = 0.0089)। ছিৰাম আইপিএ মাত্ৰাৰ সৈতে জড়িত মাইট'কণ্ড্ৰিয়াল ট্ৰান্সক্ৰিপ্টৰ বাবে আমি এপ'প্টোছিছ (FDR = 0.00001), মাইট'ফেজি (FDR = 0.00029), আৰু TNF সংকেত পথ (FDR = 0.000006) (চিত্ৰ 1A, সূচী 2, আৰু পৰিপূৰক চিত্ৰ 1A-B)ৰ ওপৰত গুৰুত্ব দিলোঁ।
ছিৰাম আইপিএৰ মাত্ৰাৰ সৈতে জড়িত মানৱ যকৃতত গ্লোবেল, মাইট'কণ্ড্ৰিয়া-সংলগ্ন ট্ৰান্সক্ৰিপ্ট আৰু ডিএনএ মিথাইলেচনৰ ওভাৰলেপিং বিশ্লেষণ। A-এ ২৬৮টা গ্ল'বেল ট্ৰান্সক্ৰিপ্ট, ১১৯টা মাইট'কণ্ড্ৰিয়া-সংলগ্ন ট্ৰান্সক্ৰিপ্ট, আৰু ডিএনএ মিথাইলেটেড ট্ৰান্সক্ৰিপ্টক প্ৰতিনিধিত্ব কৰে যিবোৰ ছিৰাম আইপিএৰ মাত্ৰাৰ সৈতে জড়িত ৩০৯২টা চিপিজি ছাইটত মেপ কৰা হয় (গ্ল'বেল ট্ৰান্সক্ৰিপ্ট আৰু ডিএনএ মিথাইলেটেডৰ বাবে p মান < ০.০১, আৰু মাইট'কণ্ড্ৰিয়াল ট্ৰান্সক্ৰিপ্টৰ বাবে p মান < ০.০৫)। প্ৰধান ওভাৰলেপিং ট্ৰান্সক্ৰিপ্টসমূহ মাজত দেখুওৱা হৈছে (AKT1 আৰু YKT6)। B অন্যান্য জিনৰ সৈতে সৰ্বোচ্চ পাৰস্পৰিক ক্ৰিয়াৰ স্ক’ৰ (০.৯০০) পোৱা ১৩টা জিনৰ পাৰস্পৰিক ক্ৰিয়াৰ মানচিত্ৰ অনলাইন সঁজুলি StringDB ব্যৱহাৰ কৰি ৫৬টা ওভাৰলেপিং জিনৰ পৰা (ক’লা ৰেখা অঞ্চল) নিৰ্মাণ কৰা হৈছিল যিবোৰ ছিৰাম আইপিএৰ মাত্ৰাৰ সৈতে যথেষ্ট জড়িত আছিল। সেউজীয়া: জিন অন্তৰ্নিহিততা (GO) কোষীয় উপাদানৰ সৈতে মেপ কৰা জিন: মাইট’কণ্ড্ৰিয়া (GO:0005739)। তথ্যৰ ওপৰত ভিত্তি কৰি (টেক্সট মাইনিং, পৰীক্ষা, তথ্যকোষ আৰু সহ-প্ৰকাশৰ ওপৰত ভিত্তি কৰি) অন্য প্ৰটিনৰ সৈতে পাৰস্পৰিক ক্ৰিয়াৰ বাবে AKT1 হৈছে সৰ্বোচ্চ নম্বৰ (০.৯০০) পোৱা প্ৰটিন। নেটৱৰ্ক ন'ডে প্ৰটিনক প্ৰতিনিধিত্ব কৰে, আৰু প্ৰান্তই প্ৰটিনৰ মাজৰ সংযোগক প্ৰতিনিধিত্ব কৰে।
যিহেতু আন্ত্ৰিক মাইক্ৰ’বায়’টা বিপাকীয় পদাৰ্থই ডি এন এ মিথাইলেচনৰ জৰিয়তে এপিজেনেটিক গঠন নিয়ন্ত্ৰণ কৰিব পাৰে [32] , আমি ছিৰামৰ আই পি এৰ মাত্ৰা যকৃতৰ ডি এন এ মিথাইলেচনৰ সৈতে জড়িত নেকি সেই বিষয়ে অনুসন্ধান কৰিলোঁ। আমি দেখিলোঁ যে ছিৰাম আইপিএৰ মাত্ৰাৰ সৈতে জড়িত দুটা প্ৰধান মিথাইলেচন স্থান প্ৰ’লিন-চেৰিন সমৃদ্ধ অঞ্চল ৩ (C19orf55) আৰু হিট শ্বক প্ৰটিন পৰিয়াল বি (সৰু) সদস্য ৬ (HSPB6) (অতিৰিক্ত ফাইল ৩)ৰ ওচৰত আছিল। 4350 CpG (p < 0.01) ৰ DNA মিথাইলেচন ছিৰাম IPA মাত্ৰাৰ সৈতে সম্পৰ্কিত আছিল আৰু দীৰ্ঘায়ু নিয়ন্ত্ৰণ পথত সমৃদ্ধ আছিল (p = 0.006) (চিত্ৰ 1A, সূচী 2, আৰু পৰিপূৰক চিত্ৰ 1C)।
ছিৰাম আইপিএৰ মাত্ৰা, গ্ল’বেল ট্ৰান্সক্ৰিপ্ট, মাইট’কণ্ড্ৰিয়া-সংলগ্ন ট্ৰান্সক্ৰিপ্ট আৰু মানৱ যকৃতত ডিএনএ মিথাইলেচনৰ মাজৰ সম্পৰ্ক বুজিবলৈ আমি পূৰ্বৰ পথ বিশ্লেষণত চিনাক্ত কৰা জিনসমূহৰ ওভাৰলেপ বিশ্লেষণ কৰিলোঁ (চিত্ৰ ১এ)। ৫৬টা ওভাৰলেপিং জিনৰ পথ সমৃদ্ধি বিশ্লেষণৰ ফলাফলত (চিত্ৰ ১A ত ক'লা ৰেখাৰ ভিতৰত) এপ'প্টোছিছ পথে (p = ০.০০০২৯) তিনিটা বিশ্লেষণৰ বাবে সাধাৰণ দুটা জিনক উজ্জ্বল কৰি তুলিছে: AKT1 আৰু YKT6 (YKT6 v-SNARE homolog), যিটো ভেন ডায়াগ্ৰামত দেখুওৱা হৈছে (পৰিপূৰক চিত্ৰ ২ আৰু চিত্ৰ ১A)। আমোদজনকভাৱে আমি দেখিলোঁ যে AKT1 (cg19831386) আৰু YKT6 (cg24161647) ছিৰাম আইপিএৰ মাত্ৰাৰ সৈতে ইতিবাচক সম্পৰ্ক আছে (অতিৰিক্ত ফাইল ৩)। জিন উৎপাদনসমূহৰ মাজত সম্ভাৱ্য প্ৰটিনৰ পাৰস্পৰিক ক্ৰিয়া চিনাক্ত কৰিবলৈ আমি ৫৬টা ওভাৰলেপিং জিনৰ ভিতৰত সৰ্বোচ্চ সাধাৰণ অঞ্চল স্ক’ৰ (০.৯০০) থকা ১৩টা জিনক ইনপুট হিচাপে বাছি লৈছিলো আৰু এটা পাৰস্পৰিক ক্ৰিয়াৰ মানচিত্ৰ নিৰ্মাণ কৰিলোঁ। আত্মবিশ্বাসৰ স্তৰ অনুসৰি (প্ৰান্তীয় আস্থা) সৰ্বোচ্চ স্ক’ৰ (০.৯০০) পোৱা AKT1 জিনটো শীৰ্ষত আছিল (চিত্ৰ ১B)।
পথ বিশ্লেষণৰ ভিত্তিত আমি দেখিলোঁ যে এপ’প্টোছিছ হৈছে প্ৰধান পথ, গতিকে আমি অনুসন্ধান কৰিলোঁ যে আই পি এ চিকিৎসাই ইন ভিট্ৰ’ত এইচ এছ চিৰ এপ’প্টোছিছত প্ৰভাৱ পেলাব নেকি। আমি পূৰ্বে প্ৰমাণ কৰিছিলো যে আইপিএৰ বিভিন্ন মাত্ৰা (১০ মাইক্ৰ'মিটাৰ, ১০০ মাইক্ৰ'মিটাৰ, আৰু ১ মিলিমিটাৰ) এলএক্স-২ কোষৰ বাবে বিষাক্ত নহয় [15] । এই অধ্যয়নত দেখা গৈছে যে ১০ মাইক্ৰ’মিটাৰ আৰু ১০০ মাইক্ৰ’মিটাৰত আইপিএ চিকিৎসা কৰিলে জীৱন ধাৰণ ক্ষম আৰু নেক্ৰটিক কোষৰ সংখ্যা বৃদ্ধি পায়। কিন্তু নিয়ন্ত্ৰণ গোটৰ তুলনাত ১ মিলিমিটাৰ আই পি এৰ ঘনত্বত কোষৰ জীৱন ক্ষমতা হ্ৰাস পায়, আনহাতে কোষৰ নেক্ৰচিছৰ হাৰ অপৰিৱৰ্তিত হৈ থাকে (চিত্ৰ ২A, B)। ইয়াৰ পিছত, LX-2 কোষত এপ'প্টোছিছ প্ৰৰোচিত কৰিবলৈ অনুকূল ঘনত্ব বিচাৰিবলৈ, আমি 10 μM, 100 μM, আৰু 1 mM IPA 24 ঘন্টা পৰীক্ষা কৰিলোঁ (চিত্ৰ 2A-E আৰু পৰিপূৰক চিত্ৰ 3A-B)। আমোদজনকভাৱে, আইপিএ ১০ মাইক্ৰ’মিটাৰ আৰু ১০০ মাইক্ৰ’মিটাৰে এপ’প্টোছিছৰ হাৰ (%) হ্ৰাস কৰে, অৱশ্যে আইপিএ ১ মিলিমিটাৰে নিয়ন্ত্ৰণৰ তুলনাত পলমকৈ এপ’প্টোছিছ আৰু এপ’প্টোছিছৰ হাৰ (%) বৃদ্ধি কৰে আৰু সেয়েহে ইয়াক অধিক পৰীক্ষাৰ বাবে বাছি লোৱা হয় (চিত্ৰ ২এ–ডি)।
আই পি এয়ে এল এক্স-২ কোষৰ এপ’প্টোছিছৰ সৃষ্টি কৰে। ফ্ল’ চাইট’মেট্ৰিৰ দ্বাৰা এপ’প্টোটিক হাৰ আৰু কোষৰ আকৃতিৰ পৰিমাণ নিৰ্ণয় কৰিবলৈ এনেক্সিন ভি আৰু ৭-এএডি ডাবল ষ্টেইনিং পদ্ধতি ব্যৱহাৰ কৰা হৈছিল। BA কোষক 10 μM, 100 μM আৰু 1 mM IPA ৰ সৈতে 24 ঘন্টা বা F–H TGF-β1 (5 ng/ml) আৰু 1 mM IPA ৰ সৈতে ছিৰাম-মুক্ত মাধ্যমত 24 ঘন্টা ইনকিউবেট কৰা হৈছিল। উ: জীৱিত কোষ (এনেক্সিন ভি -/ ৭এএডি-); খ: নেক্ৰটিক কোষ (এনেক্সিন ভি -/ ৭এএডি+); C, F: আৰম্ভণিতে (এনেক্সিন V +/ 7AAD-); D, G: দেৰিকৈ (এনেক্সিন V+/7AAD.+); ই, এইচ: এপ’প্টোটিক হাৰত মুঠ আৰম্ভণি আৰু শেষৰ এপ’প্টোটিক কোষৰ শতাংশ (%)। তথ্যসমূহ গড় ± SD, n = 3 টা স্বতন্ত্ৰ পৰীক্ষা হিচাপে প্ৰকাশ কৰা হৈছে। পৰিসংখ্যাগত তুলনা বনফেৰ’নি পষ্ট হক পৰীক্ষাৰ সৈতে একমুখী ANOVA ব্যৱহাৰ কৰি কৰা হৈছিল। *p < ০.০৫; ****p < ০.০০০১
আমি আগতে দেখুৱাইছো যে ৫ ng/ml TGF-β1 এ ধ্ৰুপদী মাৰ্কাৰ জিনৰ প্ৰকাশ বৃদ্ধি কৰি HSC সক্ৰিয়কৰণ প্ৰৰোচিত কৰিব পাৰে [15] । LX-2 কোষক 5 ng/ml TGF-β1 আৰু 1 mM IPA সংযুক্তভাৱে চিকিৎসা কৰা হৈছিল (চিত্ৰ 2E–H)। TGF-β1 চিকিৎসাই এপ'প্টোছিছৰ হাৰ সলনি কৰা নাছিল, অৱশ্যে আইপিএ সহ-চিকিৎসাই TGF-β1 চিকিৎসাৰ তুলনাত পলমকৈ এপ'প্টোছিছ আৰু এপ'প্টোছিছৰ হাৰ (%) বৃদ্ধি কৰে (চিত্ৰ 2E–H)। এই ফলাফলসমূহে ইংগিত দিয়ে যে ১ মিলিমিটাৰ আইপিএই TGF-β1 প্ৰৰোচনাৰ পৰা স্বাধীনভাৱে LX-2 কোষত এপ’প্টোছিছক প্ৰসাৰিত কৰিব পাৰে।
আমি এল এক্স-২ কোষত মাইট’কণ্ড্ৰিয়াল শ্বাস-প্ৰশ্বাসৰ ওপৰত আই পি এৰ প্ৰভাৱৰ বিষয়ে অধিক অনুসন্ধান কৰিলোঁ। ফলাফলত দেখা গ’ল যে ১ মিলিমিটাৰ আইপিএই নিয়ন্ত্ৰণ গোটৰ তুলনাত অক্সিজেন খৰচৰ হাৰ (OCR) পৰিমাপ হ্ৰাস কৰে: নন-মাইট’কণ্ড্ৰিয়াল শ্বাস-প্ৰশ্বাস, ভিত্তি আৰু সৰ্বোচ্চ শ্বাস-প্ৰশ্বাস, প্ৰ’টন লিক আৰু এটিপি উৎপাদন (চিত্ৰ ৩এ, বি), আনহাতে জৈৱশক্তিৰ স্বাস্থ্য সূচকাংক (বিএইচআই)ৰ কোনো পৰিৱৰ্তন হোৱা নাছিল।
আই পি এয়ে এল এক্স-২ কোষত মাইট’কণ্ড্ৰিয়াৰ শ্বাস-প্ৰশ্বাস হ্ৰাস কৰে। মাইট’কণ্ড্ৰিয়াল শ্বাস-প্ৰশ্বাস বক্ৰ (OCR) মাইট’কণ্ড্ৰিয়াল শ্বাস-প্ৰশ্বাসৰ পৰিমাপ (অ-মাইট’কণ্ড্ৰিয়াল শ্বাস-প্ৰশ্বাস, ভিত্তি শ্বাস-প্ৰশ্বাস, সৰ্বোচ্চ শ্বাস-প্ৰশ্বাস, প্ৰ’টন লিক, এ টি পি উৎপাদন, এছ আৰ চি আৰু বি এইচ আই) হিচাপে উপস্থাপন কৰা হৈছে। কোষ A আৰু B ক্ৰমে 10 μM, 100 μM আৰু 1 mM IPA ৰ সৈতে 24 ঘন্টা ইনকিউবেট কৰা হৈছিল। কোষ C আৰু D ক TGF-β1 (5 ng/ml) আৰু 1 mM IPA ৰ সৈতে ছিৰাম-মুক্ত মাধ্যমত ক্ৰমে ২৪ ঘন্টা ইনকিউবেট কৰা হৈছিল। সকলো জোখ-মাখ CyQuant কিট ব্যৱহাৰ কৰি ডি এন এৰ পৰিমাণলৈ স্বাভাৱিক কৰা হৈছিল। বি এইচ আই: জৈৱশক্তিশালী স্বাস্থ্য সূচকাংক; এছ আৰ চি: শ্বাস-প্ৰশ্বাসৰ সংৰক্ষিত ক্ষমতা; অ’চিআৰ: অক্সিজেনৰ ব্যৱহাৰৰ হাৰ। তথ্যসমূহ গড় ± মানক বিচ্যুতি (SD), n = 5 টা স্বতন্ত্ৰ পৰীক্ষা হিচাপে উপস্থাপন কৰা হৈছে। একমুখী ANOVA আৰু Bonferroni post hoc test ব্যৱহাৰ কৰি পৰিসংখ্যাগত তুলনা কৰা হৈছিল। *p < ০.০৫; **p < ০.০১; আৰু ***p < ০.০০১
TGF-β1-সক্ৰিয় LX-2 কোষৰ জৈৱশক্তিশালী প্ৰফাইলৰ ওপৰত IPA প্ৰভাৱৰ বিষয়ে অধিক ব্যাপক বুজাবুজি লাভ কৰিবলৈ, আমি OCR (চিত্ৰ. 3C,D) দ্বাৰা মাইট'কণ্ড্ৰিয়াল অক্সিডেটিভ ফচফৰাইলেচন বিশ্লেষণ. ফলাফলত দেখা গ’ল যে নিয়ন্ত্ৰণ গোটৰ তুলনাত TGF-β1 চিকিৎসাই সৰ্বোচ্চ শ্বাস-প্ৰশ্বাস, শ্বাস-প্ৰশ্বাসৰ সংৰক্ষিত ক্ষমতা (SRC) আৰু BHI হ্ৰাস কৰিব পাৰে (চিত্ৰ 3C,D)। ইয়াৰ উপৰিও সংমিশ্ৰিত চিকিৎসাৰ ফলত ভিত্তি শ্বাস-প্ৰশ্বাস, প্ৰ’টন লিক আৰু এ টি পি উৎপাদন হ্ৰাস পায়, কিন্তু টি জি এফ-বেটা ১ দ্বাৰা চিকিৎসা কৰাতকৈ এছ আৰ চি আৰু বি এইচ আই যথেষ্ট বেছি আছিল (চিত্ৰ ৩চি,ডি)।
আমি Seahorse চফট্ ৱেৰৰ দ্বাৰা প্ৰদান কৰা “Cellular Energy Phenotype Test” (পৰিপূৰক চিত্ৰ. 4A–D)ও সম্পন্ন কৰিলোঁ। 3B ত দেখুওৱাৰ দৰে TGF-β1 চিকিৎসাৰ পিছত OCR আৰু ECAR দুয়োটা বিপাকীয় সম্ভাৱনা হ্ৰাস পাইছিল, অৱশ্যে নিয়ন্ত্ৰণ গোটৰ তুলনাত সংমিশ্ৰণ আৰু IPA চিকিৎসা গোটত কোনো পাৰ্থক্য দেখা পোৱা নগ'ল। তদুপৰি, নিয়ন্ত্ৰণ গোটৰ তুলনাত সংমিশ্ৰণ আৰু আইপিএ চিকিৎসাৰ পিছত অ’চিআৰৰ ভিত্তি আৰু চাপৰ মাত্ৰা দুয়োটা হ্ৰাস পায় (পৰিপূৰক চিত্ৰ ৪চি)। আমোদজনকভাৱে, কম্বিনেচন থেৰাপীৰ সৈতেও একেধৰণৰ আৰ্হি দেখা গৈছিল, য'ত TGF-β1 চিকিৎসাৰ তুলনাত ECAR ৰ ভিত্তি আৰু চাপৰ মাত্ৰাত কোনো পৰিৱৰ্তন দেখা নগ'ল (পৰিপূৰক চিত্ৰ. 4C)। এইচ এছ চি সমূহত মাইট’কণ্ড্ৰিয়াল অক্সিডেটিভ ফছফৰাইলেচন হ্ৰাস আৰু টি জি এফ-বেটা ১ চিকিৎসাৰ সংস্পৰ্শলৈ অহাৰ পিছত এছ চি আৰ আৰু বি এইচ আই পুনৰুদ্ধাৰ কৰাৰ সংমিশ্ৰিত চিকিৎসাৰ ক্ষমতাই বিপাকীয় সম্ভাৱনা (OCR আৰু ECAR)ৰ পৰিৱৰ্তন কৰা নাছিল। আইপিএই এইচএছচিসমূহত জৈৱশক্তিশক্তি হ্ৰাস কৰিব পাৰে বুলি ইংগিত দিয়ে, ইয়াৰ পৰা অনুমান কৰিব পাৰি যে আইপিএই কম শক্তিশালী প্ৰফাইল প্ৰৰোচিত কৰিব পাৰে যিয়ে এইচএছচি ফেন'টাইপক নিষ্ক্ৰিয়তাৰ দিশলৈ স্থানান্তৰিত কৰে (পৰিপূৰক চিত্ৰ ৪ডি)।
মাইট'কণ্ড্ৰিয়াৰ গতিবিদ্যাৰ ওপৰত আইপিএৰ প্ৰভাৱ মাইট'কণ্ড্ৰিয়াৰ আকৃতি আৰু নেটৱৰ্ক সংযোগৰ ত্ৰিমাত্ৰিক পৰিমাণ নিৰ্ণয়ৰ লগতে এমটিআৰ ষ্টেইনিং ব্যৱহাৰ কৰি অনুসন্ধান কৰা হৈছিল (চিত্ৰ ৪ আৰু পৰিপূৰক চিত্ৰ ৫)। ৪ নং চিত্ৰত দেখুওৱা হৈছে যে নিয়ন্ত্ৰণ গোটৰ তুলনাত TGF-β1 চিকিৎসাই গড় পৃষ্ঠভাগৰ ক্ষেত্ৰফল, শাখাৰ সংখ্যা, মুঠ শাখাৰ দৈৰ্ঘ্য আৰু শাখাৰ সংযোগ সংখ্যা হ্ৰাস কৰে (চিত্ৰ ৪A আৰু B) আৰু মাইট’কণ্ড্ৰিয়াৰ অনুপাত গোলাকাৰ পৰা মধ্যৱৰ্তী আকৃতিলৈ সলনি কৰে (চিত্ৰ ৪C)। কেৱল আই পি এ চিকিৎসাই গড় মাইট’কণ্ড্ৰিয়াৰ আয়তন হ্ৰাস কৰে আৰু নিয়ন্ত্ৰণ গোটৰ তুলনাত মাইট’কণ্ড্ৰিয়াৰ অনুপাত গোলাকাৰ পৰা মধ্যৱৰ্তী আকৃতিলৈ সলনি কৰে (চিত্ৰ ৪A)। ইয়াৰ বিপৰীতে মাইট'কণ্ড্ৰিয়াল মেমব্ৰেন সম্ভাৱনা-নিৰ্ভৰশীল এমটিআৰ (চিত্ৰ ৪এ আৰু ই) দ্বাৰা মূল্যায়ন কৰা গোলাকাৰতা, গড় শাখাৰ দৈৰ্ঘ্য আৰু মাইট'কণ্ড্ৰিয়াৰ কাৰ্য্যকলাপ অপৰিৱৰ্তিত হৈ থাকে আৰু এই পৰিমাপসমূহৰ গোটসমূহৰ মাজত পাৰ্থক্য নাছিল। এই ফলাফলসমূহ একেলগে ল’লে দেখা যায় যে TGF-β1 আৰু IPA চিকিৎসাই জীৱিত LX-2 কোষত মাইট’কণ্ড্ৰিয়াৰ আকৃতি আৰু আকাৰৰ লগতে নেটৱৰ্ক জটিলতাক নিয়ন্ত্ৰণ কৰা যেন লাগে।
আই পি এয়ে এল এক্স-২ কোষত মাইট’কণ্ড্ৰিয়াৰ গতিশীলতা আৰু মাইট’কণ্ড্ৰিয়াৰ ডি এন এৰ প্ৰাচুৰ্য্যৰ পৰিৱৰ্তন ঘটায়। জীৱিত LX-2 কোষৰ প্ৰতিনিধিত্বমূলক কনফ'কেল ছবি ছিৰাম-মুক্ত মাধ্যমত TGF-β1 (5 ng/ml) আৰু 1 mM IPA ৰ সৈতে 24 ঘন্টা ইনকিউবেট কৰা হয়, য'ত মাইট'কণ্ড্ৰিয়াল নেটৱৰ্ক দেখা যায়। সকলো তথ্যতে প্ৰতিটো গোটত কমেও ১৫টা ছবি আছিল। আমি প্ৰতিটো নমুনাৰ ধৰণৰ বাবে ১০ টা Z-stack ছবি আহৰণ কৰিলোঁ। প্ৰতিটো Z-অক্ষ ক্ৰমত ৩০টা স্লাইচ আছিল, প্ৰত্যেকৰে ডাঠ আছিল ৯.৮৬ μm। স্কেল বাৰ: ১০ মাইক্ৰ’মিটাৰ। B. ছবিখনত অভিযোজিত থ্ৰেছহ’ল্ডিং প্ৰয়োগ কৰি চিনাক্ত কৰা প্ৰতিনিধিত্বমূলক বস্তু (কেৱল মাইট’কণ্ড্ৰিয়া)। প্ৰতিটো গোটৰ সকলো কোষৰ বাবে পৰিমাণগত বিশ্লেষণ আৰু মাইট’কণ্ড্ৰিয়াৰ ৰূপতাত্ত্বিক নেটৱৰ্ক সংযোগৰ তুলনা কৰা হৈছিল। গ) মাইট’কণ্ড্ৰিয়াৰ আকৃতিৰ অনুপাতৰ কম্পাঙ্ক। 0 ৰ ওচৰৰ মানসমূহে গোলাকাৰ আকৃতি সূচায়, আৰু 1 ৰ ওচৰৰ মানসমূহে ফিলামেণ্টাছ আকৃতি সূচায়। D মাইট’কণ্ড্ৰিয়াৰ ডি এন এ (mtDNA)ৰ পৰিমাণ সামগ্ৰী আৰু পদ্ধতিত বৰ্ণনা কৰা ধৰণে নিৰ্ণয় কৰা হৈছিল। E MitotrackerTM Red CMXRos বিশ্লেষণ সামগ্ৰী আৰু পদ্ধতিত বৰ্ণনা কৰা ধৰণে ফ্ল' চাইট'মেট্ৰি (৩০,০০০ পৰিঘটনা) দ্বাৰা সম্পন্ন কৰা হৈছিল। তথ্যসমূহ গড় ± SD, n = 3 টা স্বতন্ত্ৰ পৰীক্ষা হিচাপে উপস্থাপন কৰা হৈছে। একমুখী ANOVA আৰু Bonferroni post hoc test ব্যৱহাৰ কৰি পৰিসংখ্যাগত তুলনা কৰা হৈছিল। *p < ০.০৫; **p < ০.০১; ***p < ০.০০১; ****p < ০.০০০১
তাৰ পিছত আমি মাইট’কণ্ড্ৰিয়াৰ সংখ্যাৰ সূচক হিচাপে LX-2 কোষত mtDNA ৰ পৰিমাণ বিশ্লেষণ কৰিলোঁ। নিয়ন্ত্ৰণ গোটৰ সৈতে তুলনা কৰিলে TGF-β1-চিকিৎসা কৰা গোটত mtDNAৰ পৰিমাণ বৃদ্ধি পাইছিল (চিত্ৰ ৪D)। TGF-β1-চিকিৎসা কৰা গোটৰ সৈতে তুলনা কৰিলে, সংমিশ্ৰিত চিকিৎসা গোটত mtDNAৰ পৰিমাণ হ্ৰাস পাইছিল (চিত্ৰ 4D), যাৰ পৰা অনুমান কৰিব পাৰি যে IPA-এ mtDNAৰ পৰিমাণ আৰু সম্ভৱতঃ মাইট’কণ্ড্ৰিয়াৰ সংখ্যাৰ লগতে মাইট’কণ্ড্ৰিয়াৰ শ্বাস-প্ৰশ্বাস হ্ৰাস কৰিব পাৰে (চিত্ৰ 3C)। তদুপৰি, আইপিএই সংমিশ্ৰিত চিকিৎসাত mtDNAৰ পৰিমাণ হ্ৰাস কৰা যেন লাগিছিল যদিও এমটিআৰ-মধ্যস্থতাকাৰী মাইট’কণ্ড্ৰিয়াৰ কাৰ্য্যকলাপত কোনো প্ৰভাৱ পেলোৱা নাছিল (চিত্ৰ ৪A–C)।
আমি LX-2 কোষত ফাইব্ৰ'ছিছ, এপ'প্টোছিছ, জীয়াই থকা, আৰু মাইট'কণ্ড্ৰিয়াল গতিশীলতাৰ সৈতে জড়িত জিনৰ mRNA মাত্ৰাৰ সৈতে IPAৰ সম্পৰ্ক অনুসন্ধান কৰিলোঁ (চিত্ৰ 5A–D)। নিয়ন্ত্ৰণ গোটৰ তুলনাত TGF-β1-চিকিৎসা কৰা গোটটোৱে কলাজেন টাইপ I α2 চেইন (COL1A2), α-মসৃণ পেশী এক্টিন (αSMA), মেট্ৰিক্স মেটালোপ্ৰটিনেজ 2 (MMP2), মেটালোপ্ৰটিনেজ 1 (TIMP1), আৰু ডাইনামিন 1-ৰ দৰে জিন (DRP1)ৰ টিছু ইনহিবিটাৰ আদি জিনৰ প্ৰকাশ বৃদ্ধি হোৱা দেখা গৈছিল ফাইব্ৰ’ছিছ আৰু সক্ৰিয়কৰণ। তদুপৰি নিয়ন্ত্ৰণ গোটৰ সৈতে তুলনা কৰিলে TGF-β1 চিকিৎসাই নিউক্লিয়াৰ প্ৰেগনেন এক্স ৰিচেপ্টৰ (PXR), কেছপেজ ৮ (CASP8), MAPKAPK3, বি-চেল αৰ প্ৰতিৰোধক, নিউক্লিয়াৰ ফ্যাক্টৰ κ জিন লাইট পেপটাইড (NFκB1A)ৰ বৰ্ধক, আৰু নিউক্লিয়াৰ ফ্যাক্টৰ κB কাইনেজ চাবইউনিট β (IKBKB)ৰ প্ৰতিৰোধক,ৰ mRNAৰ মাত্ৰা হ্ৰাস কৰে (চিত্ৰ ৫A–D)। TGF-β1 চিকিৎসাৰ তুলনাত TGF-β1 আৰু IPA ৰ সংমিশ্ৰণ চিকিৎসাই COL1A2 আৰু MMP2ৰ প্ৰকাশ হ্ৰাস কৰে, কিন্তু PXR, TIMP1, B-cell lymphoma-2 (BCL-2), CASP8, NFκB1A, NFκB1-β, আৰু IKBKB ৰ mRNA মাত্ৰা বৃদ্ধি কৰে। আইপিএ চিকিৎসাই এমএমপি২, বিচিএল-২-সংলগ্ন প্ৰটিন এক্স (বিএএক্স), একেটি১, অপটিক এট্ৰফি প্ৰটিন ১ (অ’পিএ১), আৰু মাইট’কণ্ড্ৰিয়াল ফিউজন প্ৰ’টিন ২ (এমএফএন২)ৰ প্ৰকাশ যথেষ্ট হ্ৰাস কৰে, আনহাতে নিয়ন্ত্ৰণ গোটৰ তুলনাত চিএএছপি৮, এনএফকেবি১এ, এনএফকেবি১বি, আৰু আইকেবিকেবিৰ প্ৰকাশ বৃদ্ধি পায়। কিন্তু কেছপেজ-৩ (CASP3), এপ’প্টোটিক পেপটিডেজ এক্টিভেটিং ফ্যাক্টৰ ১ (APAF1), মাইট’কণ্ড্ৰিয়াল ফিউজন প্ৰ’টিন ১ (MFN1), আৰু ফিচন প্ৰ’টিন ১ (FIS1)ৰ প্ৰকাশৰ ক্ষেত্ৰত কোনো পাৰ্থক্য পোৱা নগ’ল। সামূহিকভাৱে এই ফলাফলসমূহে প্ৰকাশ কৰে যে আইপিএ চিকিৎসাই ফাইব্ৰ’ছিছ, এপ’প্টোছিছ, জীয়াই থকা আৰু মাইট’কণ্ড্ৰিয়াল গতিবিদ্যাৰ সৈতে জড়িত জিনৰ প্ৰকাশক নিয়ন্ত্ৰণ কৰে। আমাৰ তথ্য অনুসৰি আই পি এ চিকিৎসাই এল এক্স-২ কোষত ফাইব্ৰ’ছিছ হ্ৰাস কৰে; একে সময়তে ই ফেন’টাইপক নিষ্ক্ৰিয়তাৰ দিশলৈ স্থানান্তৰিত কৰি জীয়াই থকাৰ বাবে উদ্দীপিত কৰে।
আইপিএই এলএক্স-২ কোষত ফাইব্ৰ'ব্লাষ্ট, এপ'প্টোটিক, জীৱন ধাৰণ ক্ষমতা আৰু মাইট'কণ্ড্ৰিয়াল ডাইনেমিক্স জিনৰ প্ৰকাশক নিয়ন্ত্ৰণ কৰে। হিষ্টোগ্ৰামসমূহে এণ্ডোজেন নিয়ন্ত্ৰণ (RPLP0 বা PPIA)ৰ তুলনাত mRNA প্ৰকাশ প্ৰদৰ্শন কৰে। A য়ে ফাইব্ৰ’ব্লাষ্ট, B এ এপ’প্টোটিক কোষ, C য়ে জীয়াই থকা কোষ আৰু D য়ে মাইট’কণ্ড্ৰিয়াল ডাইনামিক্স জিন প্ৰকাশক সূচায়। তথ্যসমূহ গড় ± মানক বিচ্যুতি (SD), n = 3 টা স্বতন্ত্ৰ পৰীক্ষা হিচাপে উপস্থাপন কৰা হৈছে। একমুখী ANOVA আৰু Bonferroni post hoc test ব্যৱহাৰ কৰি পৰিসংখ্যাগত তুলনা কৰা হৈছিল। *p < ০.০৫; **p < ০.০১; ***p < ০.০০১; ****p < ০.০০০১
তাৰ পিছত, কোষৰ আকাৰ (FSC-H) আৰু চাইট'প্লাজমিক জটিলতা (SSC-H)ৰ পৰিৱৰ্তন ফ্ল' চাইট'মেট্ৰিৰ দ্বাৰা মূল্যায়ন কৰা হয় (চিত্ৰ 6A,B), আৰু IPA চিকিৎসাৰ পিছত কোষৰ আকৃতিৰ পৰিৱৰ্তন ট্ৰেন্সমিছন ইলেক্ট্ৰন মাইক্ৰস্কোপি (TEM) আৰু ফেজ কনট্ৰাষ্ট মাইক্ৰস্কোপি (পৰিপূৰক চিত্ৰ 6A-B) দ্বাৰা মূল্যায়ন কৰা হয়। আশা কৰা মতে, TGF-β1-চিকিৎসা কৰা গোটৰ কোষৰ আকাৰ নিয়ন্ত্ৰণ গোটৰ তুলনাত বৃদ্ধি পায় (চিত্ৰ 6A,B), ৰুক্ষ এণ্ডোপ্লাজমিক ৰেটিকুলাম (ER*) আৰু ফেগ'লাইছ'জম (P)ৰ ক্লাছিক সম্প্ৰসাৰণ দেখুৱাই, যিয়ে হেমাট'পয়েটিক ষ্টেম চেল (HSC) সক্ৰিয়কৰণৰ ইংগিত দিয়ে (পৰিপূৰক চিত্ৰ 6A)। তদুপৰি, TGF-β1-চিকিৎসা কৰা গোটৰ তুলনাত, কোষৰ আকাৰ, চাইট'প্লাজমিক জটিলতা (চিত্ৰ. 6A,B), আৰু ER * পৰিমাণ TGF-β1 আৰু IPA সংমিশ্ৰিত চিকিৎসা গোটত (পৰিপূৰক চিত্ৰ. 6A) হ্ৰাস পাইছিল। তদুপৰি, আইপিএ চিকিৎসা নিয়ন্ত্ৰণ গোটৰ তুলনাত কোষৰ আকাৰ, চাইট'প্লাজমিক জটিলতা (চিত্ৰ ৬এ,বি), পি আৰু ইআৰ*ৰ পৰিমাণ (পৰিপূৰক চিত্ৰ ৬এ) হ্ৰাস কৰে। তদুপৰি, নিয়ন্ত্ৰণ গোটৰ তুলনাত আইপিএ চিকিৎসাৰ ২৪ ঘণ্টাৰ পিছত এপ’প্টোটিক কোষৰ পৰিমাণ বৃদ্ধি পায় (বগা কাঁড় চিহ্ন, পৰিপূৰক চিত্ৰ ৬বি)। সামূহিকভাৱে এই ফলাফলসমূহে প্ৰকাশ কৰে যে 1 mM IPA এ HSC এপ'প্টোছিছক উদ্দীপিত কৰিব পাৰে আৰু TGF-β1 দ্বাৰা প্ৰৰোচিত কোষৰ আকৃতিগত পৰিমাপসমূহৰ পৰিৱৰ্তন উলটিব পাৰে, যাৰ ফলত কোষৰ আকাৰ আৰু জটিলতা নিয়ন্ত্ৰণ হয়, যিটো HSC নিষ্ক্ৰিয়কৰণৰ সৈতে জড়িত হ'ব পাৰে।
আই পি এয়ে এল এক্স-২ কোষত কোষৰ আকাৰ আৰু চাইট’প্লাজমিক জটিলতা সলনি কৰে। ফ্ল’ চাইট’মেট্ৰি বিশ্লেষণৰ প্ৰতিনিধিত্বমূলক ছবি। বিশ্লেষণত LX-2 কোষৰ বাবে নিৰ্দিষ্ট গেটিং কৌশল ব্যৱহাৰ কৰা হৈছিল: কোষৰ জনসংখ্যা সংজ্ঞায়িত কৰিবলৈ SSC-A/FSC-A, ডাবলেট চিনাক্ত কৰিবলৈ FSC-H/FSC-A, আৰু কোষৰ আকাৰ আৰু জটিলতা বিশ্লেষণৰ বাবে SSC-H/FSC-H। কোষবোৰক TGF-β1 (5 ng/ml) আৰু 1 mM IPA ৰ সৈতে ছিৰাম-মুক্ত মাধ্যমত ২৪ ঘন্টা ইনকিউবেট কৰা হৈছিল। কোষৰ আকাৰ আৰু চাইট’প্লাজমিক জটিলতা বিশ্লেষণৰ বাবে এল এক্স-২ কোষক তলৰ বাওঁ চতুৰ্থ অংশ (SSC-H-/FSC-H-), ওপৰৰ বাওঁ চতুৰ্থ অংশ (SSC-H+/FSC-H-), তলৰ সোঁ চতুৰ্থ অংশ (SSC-H-/FSC-H+), আৰু ওপৰৰ সোঁ চতুৰ্থ অংশ (SSC-H+/FSC-H+)ত বিতৰণ কৰা হৈছিল। B. কোষৰ আকৃতিবিজ্ঞান FSC-H (আগলৈ বিকিৰণ, কোষৰ আকাৰ) আৰু SSC-H (পাৰ্শ্ব বিকিৰণ, চাইট’প্লাজমিক জটিলতা) (৩০,০০০ পৰিঘটনা) ব্যৱহাৰ কৰি ফ্ল’ চাইট’মেট্ৰিৰ দ্বাৰা বিশ্লেষণ কৰা হৈছিল। তথ্যসমূহ গড় ± SD, n = 3 টা স্বতন্ত্ৰ পৰীক্ষা হিচাপে উপস্থাপন কৰা হৈছে। একমুখী ANOVA আৰু Bonferroni post hoc test ব্যৱহাৰ কৰি পৰিসংখ্যাগত তুলনা কৰা হৈছিল। *p < ০.০৫; **p < ০.০১; ***p < ০.০০১ আৰু ****p < ০.০০০১
আই পি এৰ দৰে আন্ত্ৰিক বিপাকীয় পদাৰ্থ গৱেষণাৰ এক উত্তপ্ত বিষয় হৈ পৰিছে, যাৰ পৰা অনুমান কৰিব পাৰি যে আন্ত্ৰিক মাইক্ৰ’বায়’টাত নতুন লক্ষ্য আৱিষ্কাৰ হ’ব পাৰে। সেয়েহে আমোদজনক কথাটো হ'ল যে আমি মানুহৰ যকৃতৰ ফাইব্ৰ'ছিছৰ সৈতে জড়িত বিপাকীয় পদাৰ্থ আইপিএ [15] জীৱ-জন্তুৰ আৰ্হিত সম্ভাৱ্য এন্টি-ফাইব্ৰ'টিক যৌগ বুলি প্ৰমাণিত হৈছে [13, 14]। ইয়াত আমি প্ৰথমবাৰৰ বাবে টাইপ ২ ডায়েবেটিছ (T2D) নথকা মেদবহুল ব্যক্তিৰ ছিৰাম আইপিএ আৰু গ্ল’বেল লিভাৰ ট্ৰেন্সক্ৰিপ্টমিক্স আৰু ডিএনএ মিথাইলেচনৰ মাজত এক সম্পৰ্ক প্ৰদৰ্শন কৰিছো, এপ’প্টোছিছ, মাইট’ফেজি আৰু দীৰ্ঘায়ুৰ লগতে যকৃতৰ হোমিঅ’ষ্টেছিছ নিয়ন্ত্ৰণ কৰা এটা সম্ভাৱ্য প্ৰাৰ্থী জিন AKT1কো উজ্জ্বল কৰি তুলিছো। আমাৰ অধ্যয়নৰ আন এটা নতুনত্ব হ’ল আমি এল এক্স-২ কোষত এপ’প্টোছিছ, কোষৰ আকৃতি, মাইট’কণ্ড্ৰিয়াল বায়’এনাৰ্জেটিক্স আৰু গতিবিদ্যাৰ সৈতে আই পি এ চিকিৎসাৰ পাৰস্পৰিক ক্ৰিয়া প্ৰদৰ্শন কৰিলোঁ, যিয়ে এইচ এছ চি ফেন’টাইপক নিষ্ক্ৰিয়কৰণৰ দিশত স্থানান্তৰিত কৰা কম শক্তিৰ বৰ্ণালীৰ ইংগিত দিয়ে, যাৰ ফলত আই পি এ লিভাৰ ফাইব্ৰ’ছিছ উন্নত কৰাৰ বাবে সম্ভাৱ্য প্ৰাৰ্থী হৈ পৰে।
আমি দেখিলোঁ যে এপ’প্টোছিছ, মাইট’ফেজি আৰু দীৰ্ঘায়ু হৈছে চলাচল কৰা ছিৰাম আইপিএৰ সৈতে জড়িত যকৃতৰ জিনত সমৃদ্ধ আটাইতকৈ গুৰুত্বপূৰ্ণ কেন’নিক পথ। মাইট'কণ্ড্ৰিয়াৰ গুণগত নিয়ন্ত্ৰণ (MQC) ব্যৱস্থাৰ বিঘিনি ঘটিলে মাইট'কণ্ড্ৰিয়াৰ অকাৰ্য্যকৰীতা, মাইট'ফেজি আৰু এপ'প্টোছিছ হ'ব পাৰে, যাৰ ফলত MASLDৰ সংঘটন বৃদ্ধি পায়[33, 34]। গতিকে আমি অনুমান কৰিব পাৰো যে যকৃতত এপ’প্টোছিছ, মাইট’ফেজি আৰু দীৰ্ঘায়ুৰ জৰিয়তে কোষৰ গতিশীলতা আৰু মাইট’কণ্ড্ৰিয়াৰ অখণ্ডতা বজাই ৰখাৰ ক্ষেত্ৰত আইপিএ জড়িত হ’ব পাৰে। আমাৰ তথ্যই দেখুৱাইছে যে তিনিটা পৰীক্ষাৰ ভিতৰত দুটা জিন সাধাৰণ আছিল: YKT6 আৰু AKT1। মন কৰিবলগীয়া যে YKT6 হৈছে কোষ পৰ্দাৰ সংযোজন প্ৰক্ৰিয়াৰ লগত জড়িত এটা SNARE প্ৰটিন। ই অটোফেগ'জমত STX17 আৰু SNAP29ৰ সৈতে এটা আৰম্ভণি কমপ্লেক্স গঠন কৰি অটোফেজি আৰু মাইট'ফেজিত ভূমিকা পালন কৰে, যাৰ ফলত অটোফেগ'জম আৰু লাইছ'জমৰ সংযোজন প্ৰসাৰিত হয়[35]। তদুপৰি, YKT6ৰ কাৰ্য্যক্ষমতা হেৰুৱাৰ ফলত মাইট'ফেজিৰ ক্ষতি হয়[36], আনহাতে YKT6 ৰ উৰ্ধ নিয়ন্ত্ৰণ হেপাটোচেলুলাৰ কাৰ্চিনোমা (HCC)ৰ অগ্ৰগতিৰ সৈতে জড়িত, যিয়ে কোষৰ অস্তিত্ব বৃদ্ধি কৰে[37]। আনহাতে, AKT1 হৈছে আটাইতকৈ গুৰুত্বপূৰ্ণ পাৰস্পৰিক ক্ৰিয়া কৰা জিন আৰু ই যকৃতৰ ৰোগত গুৰুত্বপূৰ্ণ ভূমিকা পালন কৰে, য'ত PI3K/AKT সংকেত পথ, কোষ চক্ৰ, কোষৰ প্ৰব্ৰজন, প্ৰসাৰ, কেন্দ্ৰীয় আঠাযুক্ত, মাইট'কণ্ড্ৰিয়াৰ কাৰ্য্য, আৰু কলাজেন নিঃসৰণ আদি অন্তৰ্ভুক্ত[38–40]। সক্ৰিয় PI3K/AKT সংকেত পথে ৰক্তসৃষ্টিকাৰী ষ্টেম চেল (HSCs) সক্ৰিয় কৰিব পাৰে, যিবোৰ হৈছে বহিঃকোষীয় মেট্ৰিক্স (ECM) উৎপাদনৰ বাবে দায়বদ্ধ কোষ আৰু ইয়াৰ অনিয়ন্ত্ৰণে যকৃতৰ ফাইব্ৰ'ছিছৰ সংঘটন আৰু অগ্ৰগতিত অৰিহণা যোগাব পাৰে[40]। ইয়াৰ উপৰিও AKT হৈছে p53-নিৰ্ভৰশীল কোষ এপ'প্টোছিছক বাধা দিয়া কোষৰ জীয়াই থকাৰ অন্যতম মূল কাৰক, আৰু AKT সক্ৰিয়কৰণ যকৃতৰ কোষৰ এপ'প্টোছিছৰ প্ৰতিৰোধৰ সৈতে জড়িত হ'ব পাৰে[41, 42]। প্ৰাপ্ত ফলাফলসমূহে প্ৰকাশ কৰে যে আইপিএ এপ’প্টোছিছত প্ৰৱেশ বা জীয়াই থকাৰ মাজৰ সিদ্ধান্তত প্ৰভাৱ পেলাই যকৃতৰ মাইট’কণ্ড্ৰিয়া-সংলগ্ন এপ’প্টোছিছৰ সৈতে জড়িত হ’ব পাৰে। এই প্ৰভাৱসমূহ AKT আৰু/বা YKT6 প্ৰাৰ্থী জিনৰ দ্বাৰা নিয়ন্ত্ৰিত হ’ব পাৰে, যিবোৰ যকৃতৰ হোমিঅ’ষ্টেছিছৰ বাবে অতি গুৰুত্বপূৰ্ণ।
আমাৰ ফলাফলত দেখা গ’ল যে ১ মিলিমিটাৰ আইপিএই TGF-β1 চিকিৎসাৰ পৰা স্বাধীন এলএক্স-২ কোষত এপ’প্টোছিছ আৰু মাইট’কণ্ড্ৰিয়াল শ্বাস-প্ৰশ্বাসৰ প্ৰৰোচনা কৰে। মন কৰিবলগীয়া যে এপ'প্টোছিছ হৈছে ফাইব্ৰ'ছিছ ৰিজ'লিউচন আৰু হেমাট'পয়েটিক ষ্টেম চেল (HSC) সক্ৰিয়কৰণৰ এটা প্ৰধান পথ, আৰু ই লিভাৰ ফাইব্ৰ'ছিছৰ উলটিব পৰা শাৰীৰিক প্ৰতিক্ৰিয়াৰ এটা মূল পৰিঘটনাও [4, 43]। তদুপৰি, সংমিশ্ৰিত চিকিৎসাৰ পিছত এল এক্স-২ কোষত বি এইচ আই পুনৰুদ্ধাৰে মাইট’কণ্ড্ৰিয়াল বায়’এনাৰ্জেটিক্স নিয়ন্ত্ৰণত আই পি এৰ সম্ভাৱ্য ভূমিকা সম্পৰ্কে নতুন অন্তৰ্দৃষ্টি প্ৰদান কৰে। জিৰণি আৰু নিষ্ক্ৰিয় অৱস্থাত ৰক্তসৃষ্টিকাৰী কোষে সাধাৰণতে এ টি পি উৎপন্ন কৰিবলৈ মাইট’কণ্ড্ৰিয়াল অক্সিডেটিভ ফছফৰাইলেচন ব্যৱহাৰ কৰে আৰু ইয়াৰ বিপাকীয় কাৰ্য্যকলাপ কম। আনহাতে, এইচ এছ চি সক্ৰিয়কৰণে মাইট'কণ্ড্ৰিয়াৰ শ্বাস-প্ৰশ্বাস আৰু জৈৱসংশ্লেষণ বৃদ্ধি কৰি গ্লাইকোলাইটিক অৱস্থাত প্ৰৱেশ কৰাৰ শক্তিৰ চাহিদা ক্ষতিপূৰণ কৰে [44] । আইপিএই বিপাকীয় সম্ভাৱনা আৰু ইচিএআৰত কোনো প্ৰভাৱ পেলোৱা নাছিল, ইয়াৰ পৰা অনুমান কৰিব পাৰি যে গ্লাইকোলাইটিক পথটোক কম অগ্ৰাধিকাৰ দিয়া হৈছে। একেদৰে আন এটা অধ্যয়নত দেখা গৈছে যে ১ মিলিমিটাৰ আইপিএই কাৰ্ডিঅ’মাই’চাইট, মানৱ হেপাটোচাইট কোষ ৰেখা (Huh7) আৰু মানৱ নাভিৰ শিৰাৰ এণ্ড’থেলিয়াল কোষ (HUVEC)ত মাইট’কণ্ড্ৰিয়াল শ্বাস-প্ৰশ্বাসৰ শৃংখলৰ কাৰ্য্যকলাপ নিয়ন্ত্ৰণ কৰিবলৈ সক্ষম হয়; কিন্তু কাৰ্ডিঅ'মাই'চাইটত গ্লাইকোলাইছিছৰ ওপৰত আইপিএৰ কোনো প্ৰভাৱ পোৱা নগ'ল, ইয়াৰ পৰা অনুমান কৰিব পাৰি যে আইপিএই অন্য কোষ প্ৰকাৰৰ জৈৱশক্তিশক্তিত প্ৰভাৱ পেলাব পাৰে [45] । গতিকে আমি অনুমান কৰিছোঁ যে ১ মিলিমিটাৰ আইপিএই মৃদু ৰাসায়নিক আনকাপলাৰ হিচাপে কাম কৰিব পাৰে, কিয়নো ই mtDNA ৰ পৰিমাণ সলনি নকৰাকৈ ফাইব্ৰ'জেনিক জিন প্ৰকাশ, কোষৰ আকৃতি আৰু মাইট'কণ্ড্ৰিয়াল বায়'এনাৰ্জেটিক্স যথেষ্ট হ্ৰাস কৰিব পাৰে [46] । মাইট'কণ্ড্ৰিয়াল আনকাপলাৰে কালচাৰ-প্ৰৰোচিত ফাইব্ৰ'ছিছ আৰু এইচ এছ চি সক্ৰিয়কৰণক বাধা দিব পাৰে [47] আৰু কিছুমান প্ৰটিন যেনে আনকাপলিং প্ৰ'টিন (UCP) বা এডেনিন নিউক্লিঅ'টাইড ট্ৰেন্সলকেজ (ANT) দ্বাৰা নিয়ন্ত্ৰিত বা প্ৰৰোচিত মাইট'কণ্ড্ৰিয়াল এ টি পি উৎপাদন হ্ৰাস কৰিব পাৰে। কোষৰ প্ৰকাৰৰ ওপৰত নিৰ্ভৰ কৰি এই পৰিঘটনাই কোষক এপ'প্টোছিছৰ পৰা ৰক্ষা কৰিব পাৰে আৰু/বা এপ'প্টোছিছক প্ৰসাৰিত কৰিব পাৰে [46] । কিন্তু ৰক্তসৃষ্টিকাৰী ষ্টেম চেল নিষ্ক্ৰিয়কৰণত মাইট’কণ্ড্ৰিয়াল আনকাপলাৰ হিচাপে আইপিএৰ ভূমিকা স্পষ্ট কৰিবলৈ অধিক অধ্যয়নৰ প্ৰয়োজন।
তাৰ পিছত আমি অনুসন্ধান কৰিলোঁ যে মাইট’কণ্ড্ৰিয়াৰ শ্বাস-প্ৰশ্বাসৰ পৰিৱৰ্তন জীৱিত এল এক্স-২ কোষৰ মাইট’কণ্ড্ৰিয়াৰ আকৃতিত প্ৰতিফলিত হয় নেকি। আমোদজনকভাৱে, TGF-β1 চিকিৎসাই মাইট'কণ্ড্ৰিয়াৰ অনুপাত গোলাকাৰ পৰা মধ্যৱৰ্তীলৈ সলনি কৰে, মাইট'কণ্ড্ৰিয়াৰ শাখা-প্ৰশাখা হ্ৰাস পায় আৰু মাইট'কণ্ড্ৰিয়াৰ বিভাজনৰ এটা মূল কাৰক DRP1ৰ প্ৰকাশ বৃদ্ধি কৰে [48] । তদুপৰি, মাইট'কণ্ড্ৰিয়াৰ খণ্ডিতকৰণ সামগ্ৰিক নেটৱৰ্ক জটিলতাৰ সৈতে জড়িত আৰু সংযোজনৰ পৰা বিভাজনলৈ পৰিৱৰ্তন ৰক্তসৃষ্টিকাৰী ষ্টেম চেল (HSC) সক্ৰিয়কৰণৰ বাবে গুৰুত্বপূৰ্ণ, আনহাতে মাইট'কণ্ড্ৰিয়াৰ বিভাজনৰ প্ৰতিৰোধে HSC এপ'প্টোছিছৰ সৃষ্টি কৰে [49] । এইদৰে আমাৰ ফলাফলসমূহে ইংগিত দিয়ে যে TGF-β1 চিকিৎসাই শাখা-প্ৰশাখা হ্ৰাসৰ সৈতে মাইট’কণ্ড্ৰিয়াল নেটৱৰ্কৰ জটিলতা হ্ৰাস কৰিব পাৰে, যিটো সক্ৰিয় ৰক্তসৃষ্টিকাৰী ষ্টেম চেল (HSCs)ৰ সৈতে জড়িত মাইট’কণ্ড্ৰিয়াল বিভাজনত অধিক সাধাৰণ। তদুপৰি আমাৰ তথ্যই দেখুৱাইছে যে আইপিএই মাইট’কণ্ড্ৰিয়াৰ অনুপাত গোলাকাৰ পৰা মধ্যৱৰ্তী আকৃতিলৈ সলনি কৰিব পাৰে, যাৰ ফলত অ’পিএ১ আৰু এমএফএন২ৰ প্ৰকাশ হ্ৰাস পায়। অধ্যয়নত দেখা গৈছে যে OPA1 ৰ ডাউনৰেগুলেচনে মাইট'কণ্ড্ৰিয়াল মেমব্ৰেনৰ সম্ভাৱনা হ্ৰাস কৰিব পাৰে আৰু কোষৰ এপ'প্টোছিছৰ সূচনা কৰিব পাৰে[50]। MFN2 এ মাইট'কণ্ড্ৰিয়াল সংযোজন আৰু এপ'প্টোছিছৰ মধ্যস্থতা কৰে বুলি জনা যায়[51]। প্ৰাপ্ত ফলাফলসমূহে প্ৰকাশ কৰে যে TGF-β1 আৰু/বা IPA দ্বাৰা LX-2 কোষৰ প্ৰৰোচনাই মাইট'কণ্ড্ৰিয়াৰ আকৃতি আৰু আকাৰ, লগতে সক্ৰিয়কৰণ অৱস্থা আৰু নেটৱৰ্ক জটিলতাক নিয়ন্ত্ৰণ কৰা যেন লাগে।
আমাৰ ফলাফলসমূহে ইংগিত দিয়ে যে TGFβ-1 আৰু IPAৰ সংমিশ্ৰণ চিকিৎসাই এপ’প্টোছিছ-এভাইডিং কোষত ফাইব্ৰ’ছিছ, এপ’প্টোছিছ আৰু জীয়াই থকাৰ সম্পৰ্কীয় জিনৰ mRNA প্ৰকাশ নিয়ন্ত্ৰণ কৰি mtDNA আৰু কোষৰ আকৃতিগত পৰিমাপ হ্ৰাস কৰিব পাৰে। সঁচাকৈয়ে, IPA এ AKT1 আৰু COL1A2 আৰু MMP2ৰ দৰে গুৰুত্বপূৰ্ণ ফাইব্ৰ’ছিছ জিনৰ mRNA প্ৰকাশৰ মাত্ৰা হ্ৰাস কৰিছিল, কিন্তু CASP8ৰ প্ৰকাশৰ মাত্ৰা বৃদ্ধি কৰিছিল, যিটো এপ’প্টোছিছৰ সৈতে জড়িত। আমাৰ ফলাফলত দেখা গৈছে যে আইপিএ চিকিৎসাৰ পিছত BAX প্ৰকাশ হ্ৰাস পায় আৰু TIMP1 পৰিয়ালৰ উপ-ইউনিট, BCL-2 আৰু NF-κB ৰ mRNA প্ৰকাশ বৃদ্ধি পায়, যাৰ পৰা অনুমান কৰিব পাৰি যে আইপিএই এপ’প্টোছিছ এৰাই চলা হেমাট’পয়েটিক ষ্টেম চেল (HSCs)ত জীয়াই থকাৰ সংকেতক উদ্দীপিত কৰিব পাৰে। এই অণুবোৰে সক্ৰিয় ৰক্তসৃষ্টিকাৰী ষ্টেম চেলত প্ৰ'-চাৰ্ভাইভেল সংকেত হিচাপে কাম কৰিব পাৰে, যিটো এণ্টি-এপ'প্টোটিক প্ৰ'টিনৰ প্ৰকাশ বৃদ্ধি (যেনে Bcl-2), প্ৰ'-এপ'প্টোটিক BAXৰ প্ৰকাশ হ্ৰাস, আৰু TIMP আৰু NF-κBৰ মাজত জটিল আন্তঃক্ৰিয়াৰ সৈতে জড়িত হ'ব পাৰে [5, 7]। আইপিএই পিএক্সআৰৰ জৰিয়তে ইয়াৰ প্ৰভাৱ প্ৰয়োগ কৰে, আৰু আমি দেখিলোঁ যে টিজিএফ-বিটা১ আৰু আইপিএৰ সৈতে সংমিশ্ৰিত চিকিৎসাই পিএক্সআৰ এমআৰএনএ প্ৰকাশৰ মাত্ৰা বৃদ্ধি কৰে, যিয়ে এইচএছচি সক্ৰিয়কৰণৰ দমনৰ ইংগিত দিয়ে। সক্ৰিয় পিএক্সআৰ সংকেতে ইন ভিভ' আৰু ইন ভিট্ৰ' দুয়োটাতে এইচএছচি সক্ৰিয়কৰণক বাধা দিয়ে বুলি জনা যায় [52, 53]। আমাৰ ফলাফলসমূহে ইংগিত দিয়ে যে আইপিএই এপ'প্টোছিছক প্ৰসাৰিত কৰি, ফাইব্ৰ'ছিছ আৰু মাইট'কণ্ড্ৰিয়াল বিপাকীয় ক্ৰিয়া হ্ৰাস কৰি, আৰু জীয়াই থকাৰ সংকেত বৃদ্ধি কৰি সক্ৰিয় এইচএছচিসমূহৰ নিষ্কাশনত অংশগ্ৰহণ কৰিব পাৰে, যিবোৰ সাধাৰণ প্ৰক্ৰিয়া যিয়ে সক্ৰিয় এইচএছচি ফেন'টাইপক নিষ্ক্ৰিয়কলৈ ৰূপান্তৰিত কৰে। আইপিএৰ সম্ভাৱ্য ব্যৱস্থা আৰু এপ'প্টোছিছত ভূমিকা সম্পৰ্কে আন এটা সম্ভাৱ্য ব্যাখ্যা হ'ল ই প্ৰধানকৈ মাইট'ফেজি (অন্তৰ্নিহিত পথ) আৰু বাহ্যিক টিএনএফ সংকেত পথ (তালিকা ১)ৰ জৰিয়তে অকাৰ্য্যকৰী মাইট'কণ্ড্ৰিয়াক ধুই পেলায়, যিটো এনএফ-কেবি জীয়াই থকাৰ সংকেত পথৰ সৈতে প্ৰত্যক্ষভাৱে জড়িত (পৰিপূৰক চিত্ৰ ৭)। আমোদজনকভাৱে, আইপিএ-সম্পৰ্কীয় সমৃদ্ধ জিনসমূহে এপ'প্টোটিক পথত প্ৰ'-এপ'প্টোটিক আৰু প্ৰ'-চাৰ্ভাইভেল সংকেত প্ৰৰোচিত কৰিবলৈ সক্ষম হয় [54] , ইয়াৰ পৰা অনুমান কৰিব পাৰি যে আইপিএই এই জিনসমূহৰ সৈতে ক্ৰিয়া কৰি এপ'প্টোটিক পথ বা জীয়াই থকাৰ প্ৰৰোচনা কৰিব পাৰে। কিন্তু এইচ এছ চি সক্ৰিয়কৰণৰ সময়ত আই পি এয়ে কেনেকৈ এপ’প্টোছিছ বা জীয়াই থকাৰ প্ৰৰোচনা কৰে আৰু ইয়াৰ যান্ত্ৰিক পথসমূহ এতিয়াও স্পষ্ট নহয়।
আই পি এ হৈছে খাদ্যৰ ট্ৰিপ্ট’ফেনৰ পৰা আন্ত্ৰিক মাইক্ৰ’বায়’টাৰ জৰিয়তে গঠিত এক অণুজীৱ বিপাকীয় পদাৰ্থ। অধ্যয়নত দেখা গৈছে যে ইয়াৰ অন্ত্ৰৰ পৰিৱেশত এন্টি-ইনফ্লেমেটৰী, এন্টিঅক্সিডেন্ট আৰু এপিজেনেটিক নিয়ন্ত্ৰণকাৰী গুণ আছে।[55] অধ্যয়নত দেখা গৈছে যে আইপিএই অন্ত্ৰৰ বাধাৰ কাৰ্য্যকলাপ নিয়ন্ত্ৰণ কৰিব পাৰে আৰু অক্সিডেটিভ চাপ হ্ৰাস কৰিব পাৰে, যিয়ে ইয়াৰ স্থানীয় শাৰীৰিক প্ৰভাৱত অৰিহণা যোগাব পাৰে।[56] আচলতে আইপিএ ৰক্তসঞ্চালনৰ জৰিয়তে লক্ষ্য অংগলৈ পৰিবহণ কৰা হয় আৰু যিহেতু আইপিএই ট্ৰিপ্ট'ফেন, চেৰ'টনিন আৰু ইণ্ড'ল ডেৰাইভেটিভৰ সৈতে একেধৰণৰ প্ৰধান বিপাকীয় গঠন ভাগ কৰে, আইপিএই বিপাকীয় ক্ৰিয়া প্ৰয়োগ কৰে যাৰ ফলত প্ৰতিযোগিতামূলক বিপাকীয় ভাগ্যৰ সৃষ্টি হয়।[52] আইপিএই এনজাইম বা ৰিচেপ্টৰত বান্ধনি স্থানৰ বাবে ট্ৰিপ্ট'ফেন-উত্পন্ন বিপাকীয় পদাৰ্থৰ সৈতে প্ৰতিযোগিতা কৰিব পাৰে, যিয়ে সম্ভাৱ্যভাৱে স্বাভাৱিক বিপাকীয় পথত ব্যাঘাত জন্মাব পাৰে। ইয়াৰ দ্বাৰা ইয়াৰ চিকিৎসাৰ খিৰিকীখন ভালদৰে বুজিবলৈ ইয়াৰ ফাৰ্মাকোকাইনেটিক্স আৰু ফাৰ্মাকোডাইনেমিক্সৰ ওপৰত অধিক অধ্যয়নৰ প্ৰয়োজনীয়তাৰ ওপৰত আলোকপাত কৰা হৈছে।[57] ৰক্তসৃষ্টিকাৰী ষ্টেম চেল (HSC)তো এনে হ’ব পাৰে নেকি সেয়া হ’ব লক্ষ্যণীয়।
আমি স্বীকাৰ কৰোঁ যে আমাৰ অধ্যয়নৰ কিছু সীমাবদ্ধতা আছে। আইপিএৰ সৈতে জড়িত সম্পৰ্কসমূহ বিশেষভাৱে পৰীক্ষা কৰিবলৈ আমি টাইপ ২ ডায়েবেটিছ মেলিটাছ (টি২ডিএম) ৰোগীক বাদ দিলোঁ। আমি স্বীকাৰ কৰোঁ যে ইয়াৰ ফলত টাইপ ২ ডায়েবেটিছ মেলিটাছ আৰু উন্নত যকৃতৰ ৰোগ থকা ৰোগীৰ ক্ষেত্ৰত আমাৰ তথ্যৰ ব্যাপক প্ৰযোজ্যতা সীমিত হৈ পৰে। যদিও মানুহৰ ছিৰামত আইপিএৰ শাৰীৰিক ঘনত্ব ১–১০ মাইক্ৰ'মিটাৰ [11, 20], সৰ্বোচ্চ অবিষাক্ত ঘনত্ব [15] আৰু সৰ্বোচ্চ এপ'প্টোছিছৰ হাৰৰ ওপৰত ভিত্তি কৰি ১ মিলিমিটাৰ আইপিএৰ ঘনত্ব বাছি লোৱা হৈছিল, নেক্ৰটিক কোষৰ জনসংখ্যাৰ শতাংশৰ কোনো পাৰ্থক্য নাছিল। যদিও এই অধ্যয়নত আই পি এৰ অতিশাৰীৰিক মাত্ৰা ব্যৱহাৰ কৰা হৈছিল, বৰ্তমান আই পি এৰ ফলপ্ৰসূ মাত্ৰাৰ বিষয়ে কোনো একমত নাই [52] । যদিও আমাৰ ফলাফল উল্লেখযোগ্য, আই পি এৰ বহল বিপাকীয় ভাগ্য গৱেষণাৰ এক সক্ৰিয় ক্ষেত্ৰ হৈয়েই আছে। তদুপৰি ছিৰাম আই পি এৰ মাত্ৰা আৰু যকৃতৰ ট্ৰান্সক্ৰিপ্টৰ ডি এন এ মিথাইলেচনৰ মাজৰ সম্পৰ্কৰ ওপৰত আমাৰ তথ্য কেৱল ৰক্তসৃষ্টিকাৰী ষ্টেম চেল (HSC)ৰ পৰাই নহয়, যকৃতৰ কলাৰ পৰাও পোৱা গৈছিল। ট্ৰেন্সক্ৰিপ্টম বিশ্লেষণৰ পৰা আমাৰ পূৰ্বৰ তথ্যৰ ভিত্তিত আমি মানৱ এল এক্স-২ কোষ ব্যৱহাৰ কৰিবলৈ বাছি লৈছিলো যে আই পি এ হেমাট’পয়েটিক ষ্টেম চেল (HSC) সক্ৰিয়কৰণৰ সৈতে জড়িত [15] , আৰু এইচ এছ চি হৈছে যকৃতৰ ফাইব্ৰ’ছিছৰ অগ্ৰগতিৰ সৈতে জড়িত প্ৰধান কোষ। যকৃত একাধিক কোষ প্ৰকাৰেৰে গঠিত, গতিকে আই পি এৰ ভূমিকা আৰু অন্যান্য যকৃত কোষ প্ৰকাৰৰ সৈতে ইয়াৰ পাৰস্পৰিক ক্ৰিয়াৰ বিষয়ে অধ্যয়ন কৰিবলৈ কেছপেজ সক্ৰিয়কৰণ আৰু ডি এন এ খণ্ডিতকৰণৰ সৈতে সংযুক্ত অন্যান্য কোষৰ আৰ্হি যেনে হেপাটোচাইট-এইচ এছ চি-ইমিউন কোষ সহ-সংস্কৃতি ব্যৱস্থাৰ লগতে প্ৰটিনৰ মাত্ৰাকে ধৰি ক্ৰিয়াৰ ব্যৱস্থাৰ কথা বিবেচনা কৰিব লাগে।